探討香煙煙霧提取物導(dǎo)致鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞周期變化中TGF-β1的作用.pdf

1、目的：
　　觀察香煙煙霧提取物（Cigarettesmokeextract，CSE）是否導(dǎo)致大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（RatalveolarTypeIIepithelialcell，RLE-6TN）細(xì)胞周期的改變以及在這其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）是否有發(fā)揮作用。
　　方法：
　　選用健康清潔級(jí)SD雄性大鼠8只（重量：180～220g），完全隨機(jī)平均分配為對(duì)照

2、組、煙熏組，每組4只，給予煙熏組大鼠暴露于香煙煙霧中每天6小時(shí)連續(xù)3天，于第4天處死動(dòng)物后取肺組織，進(jìn)行石蠟包埋切片后，HE染色觀察結(jié)構(gòu)改變，免疫組化法測(cè)定CyclinD1的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，除對(duì)照組外，其余各組分別予0.25％、0.5%、1%濃度的CSE刺激48h。TGF-β1受體抑制劑（SB431542）預(yù)處理細(xì)胞6h，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為對(duì)照組、1%CSE組、SB431542組、1%CSE+SB431542組，CSE

3、刺激48h。各組細(xì)胞于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞，分別采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，ELISA、Westernblot法測(cè)定TGF-β1、CyclinD1蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　煙熏組大鼠肺組織發(fā)生形態(tài)學(xué)及病理學(xué)的改變，TGF-β1表達(dá)增加、CyclinD1表達(dá)抑制（與對(duì)照組比較）。CSE暴露干預(yù)細(xì)胞后，G1期細(xì)胞的比例呈濃度依賴(lài)性與時(shí)間依賴(lài)性的增高，同時(shí)TGF-β1表達(dá)增加、CyclinD1表達(dá)