Sirt1過表達對TGF-β1誘導人腎小管上皮細胞株凋亡的影響及機制研究.pdf

1、目的:腎間質纖維化是腎臟疾病終末期的共同特征。腎小管上皮細胞可通過多種方式主動參與腎間質纖維化的發(fā)生與發(fā)展。在多種腎臟疾病的動物模型以及人體多種腎臟疾病病理標本上發(fā)現(xiàn)，間質纖維化愈重的地方，細胞凋亡數(shù)量愈多，間質纖維化程度與細胞凋亡數(shù)量成正相關。本研究著重觀察Sirt1過表達對TGF-β1誘導人腎小管上皮細胞凋亡的影響及其機制研究。
　　方法:將體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞分為正常對照組、TGF-β1刺激組及TGF-β1+Sirt1過

2、表達組。采用原位末端轉移酶標記技術（TUNEL）檢測細胞凋亡;流式細胞術及hoechst33258染色法分別檢測細胞凋亡百分比;Western blot檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2的表達;real time-PCR檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2mRNA水平;活性比色法檢測Sirt1活性;免疫細胞化學方法檢測Sirt1表達。
　　結果:①TGF-β1對人腎小管上皮細胞Sirt1蛋白及mRNA表達水平的影

3、響:較正常對照組相比，TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Sirt1mRNA及蛋白表達均顯著降低(P＜0.01）。免疫細胞化學檢測顯示，Sirt1主要表達于人腎小管上皮細胞的細胞核，對照組呈強表達，TGF-β1刺激組的Sirt1表達顯著低于正常對照組。②TGF-β1對Sirt1活性的影響:活性比色法定量檢測顯示TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Sirt1活性較正常對照組顯著降低(P＜0.01）。③轉染Sirt1質粒后人腎小管上皮細胞Sirt蛋

4、白、mRNA及活性的改變:Sirt1mRNA、蛋白表達及活性在Sirt1質粒轉染組人腎小管上皮細胞表達顯著升高(P＜0.01），表明Sirt1基因成功導入了人腎小管上皮細胞，并在蛋白水平獲得高效表達。④Sirt1過表達對TGF-β1誘導的CTGF升高及小管上皮細胞凋亡相關指標影響:與正常對照組相比，TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Bcl-2水平顯著降低（P＜0.01），Bax、CTGF水平顯著升高(P＜0.01)。Sirt1過表達能夠顯

5、著上調TGF-β1誘導的Bcl-2減少（P＜0.01），降低TGF-β1誘導的Bax、CTGF的增多(P＜0.01）。⑤Sirt1過表達對TGF-β1誘導的人小管上皮細胞凋亡百分比影響:Hoechst、TUNEL及FCM三種檢測細胞凋亡技術均顯示，與正常對照組相比，在TGF-β1刺激下，人腎小管上皮細胞凋亡百分比顯著增加(P＜0.01);與TGF-β1刺激組相比，Sirt1過表達能夠顯著減少TGF-β1誘導的細胞凋亡百分比(P＜0.05

6、)。
　　結論:
　　1在TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞時CTGF表達明顯升高，Sirt1表達顯著下降，同時細胞凋亡明顯增加。這些結果提示TGF-β1/CTGF信號傳導途徑及Sirt1下降可能因為與細胞凋亡密切相關而參與了腎間質纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程。
　　2 Sirt1過表達能夠抑制TGF-β1誘導的人腎小管上皮細胞凋亡，并且改善CTGF水平升高，提示Sirt1過表達保護作用的實現(xiàn)可能是部分通過抑制CTGF實現(xiàn)的。