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文檔簡介
1、目的:
通過觀測干細胞因子(stem cell factor,SCF)對人近端腎小管上皮細胞(HK-2)形態(tài)以及α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)和纖維粘連蛋白(fibronectin,F(xiàn)N)的表達水平的影響,探討SCF在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用。
方法:
體外
2、培養(yǎng)HK-2細胞并給予SCF刺激,按照SCF不同終濃度分為如下4組:對照組(0ng/mL)、10 ng/mL組、50 ng/mL組、100 ng/mL組,各組均培養(yǎng)24 h;按照SCF刺激時間不同分為5組(SCF終濃度均為50 ng/mL):對照組(0 h)、6 h組、12 h組、24 h組、48 h組。相差顯微鏡下觀察SCF不同濃度及刺激不同時間對HK-2細胞形態(tài)的影響,采用Real-time PCR檢測各組α-SMA、TGF-β1、
3、FN mRNA表達水平,Western印跡法檢測各組α-SMA、TGF-β1、FN蛋白的表達水平,ELISA法檢測上清液中TGF-β1的含量,并分析比較其表達水平的變化。
結(jié)果:
(1)給予SCF刺激后,HK-2細胞開始發(fā)生形態(tài)學改變,隨著SCF濃度的增加和刺激時間的延長,細胞形態(tài)逐漸由圓形或類圓形拉長為梭形。
(2)PCR及Western檢測結(jié)果顯示:分別以10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng
4、/mL SCF刺激HK-2細胞24 h,與對照組相比,α-SMA、TGF-β1、FNmRNA及蛋白表達均增高,且隨著刺激濃度增加,各因子表達逐漸增高(P<0.05)。此外,以終濃度為50 ng/mL SCF分別刺激HK-2細胞6 h、12 h、24 h、48 h,其α-SMA、TGF-β1、FN mRNA及蛋白表達均上調(diào);與對照組相比,SCF刺激6 h后,上述各因子表達稍有上調(diào),但差異無統(tǒng)計學意義(均 P>0.05),至12 h時表達明
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