高濃度氨基酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)?zāi)M高蛋白飲食后體內(nèi)氨基酸水平，從細(xì)胞水平觀察高濃度混合氨基酸以及單一高濃度甘氨酸、賴(lài)氨酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞增殖，分泌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和表達(dá)血管緊張素II-1型受體(ATlR)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)分四組：對(duì)照組(含5﹪血清的RPMI-1640培養(yǎng)液)；高濃度混合氨基酸組(每種氨基酸的水平高于1640培養(yǎng)液1.5-6倍，含5﹪血清)；高濃度甘氨酸培養(yǎng)液組(僅甘氨酸濃度較1640培養(yǎng)液升高，含5﹪血清)；

2、高濃度賴(lài)氨酸培養(yǎng)液組(僅賴(lài)氨酸濃度較1640培養(yǎng)液升高，含5﹪血清)。采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人腎小管上皮細(xì)胞(HK一2細(xì)胞)加入含不同濃度氨基酸的培養(yǎng)液分別孵育12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)。用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，觀察不同類(lèi)型的培養(yǎng)液在不同作用時(shí)間對(duì)HK-2細(xì)胞增殖的影響；選取刺激增殖作用最明顯的時(shí)間，以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)培養(yǎng)上清液中TGF-β1的濃度，用細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)HK-2細(xì)胞表達(dá)

3、ATlR的情況。采用SPSS 13.00統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)值表達(dá)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)，統(tǒng)計(jì)分析采用方差分析(S-N-K檢驗(yàn))，P<0.05為差異有顯著。 結(jié)果：1．MTT實(shí)驗(yàn)顯示高濃度混合氨基酸組、甘氨酸組、賴(lài)氨酸組均能刺激HK-2增殖，各組和對(duì)照組比較吸光度都有增加(p(0.05)；各組的促增殖作用在24小時(shí)出現(xiàn)，36小時(shí)促增殖率最大，48小時(shí)有所下降；混合氨基酸組和另外兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)比促增殖作用較強(qiáng)，吸光度較

4、高(p<0.05)；甘氨酸和賴(lài)氨酸組對(duì)比兩組數(shù)據(jù)無(wú)差別，促增殖作用相似(p>0.05)。 2．ELISA結(jié)果顯示高濃度混合氨基酸干預(yù)的細(xì)胞上清液中TGF-β1濃度明顯升高，和對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；甘氨酸組和賴(lài)氨酸組上清液中TGF-β1濃度和對(duì)照組相比無(wú)差別(p>0.05)。 3．細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示高濃度混合氨基酸干預(yù)后HK-2表達(dá)ATlR增強(qiáng)，和對(duì)照組相比染色明顯加深，平均積分光密度升高，甘氨酸組和賴(lài)氨酸組細(xì)

5、胞表達(dá)ATlR和對(duì)照組相比無(wú)差別(p>0.05)。 結(jié)論：1．高濃度混合氨基酸、高濃度甘氨酸、高濃度賴(lài)氨酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖，在24小時(shí)出現(xiàn)，36小時(shí)達(dá)高峰，隨時(shí)間增加促增殖作用略有下降?；旌习被岽僭鲋匙饔妹黠@較強(qiáng)，甘氨酸和賴(lài)氨酸促增殖作用相似； 2．高濃度混合氨基酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞分泌TGF-β1增多，高濃度甘氨酸、高濃度賴(lài)氨酸無(wú)此作用； 3．高濃度混合氨基酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)ATlR上調(diào)，高濃度甘