糖基化終產(chǎn)物對人腎小管上皮細胞FRACTALKINE表達的影響.pdf

1、目的：既往實驗已觀察到糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)可增加人腎系膜細胞fractalkine(FKN)mRNA及蛋白的表達，本實驗擬用AGEs干預(yù)體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞(tubular epithelial cells，TEC)株HK-2，觀察AGEs對HK-2細胞FKNmRNA及蛋白表達的影響，及AGEs對HK-2趨化和粘附單核細胞的影響，并進一步探討FKN是否介導(dǎo)對單核細

2、胞的趨化粘附，從而了解FKN在糖尿病腎病腎小管間質(zhì)病變中的作用。
　　 方法：運用體外制各的糖基化修飾的牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumiN,AGE-BSA)，按不同的濃度和時間干預(yù)HK-2，無血清DMEM組和BSA組做為對照，用RT-PCR檢瀏FKN mRNA的表達，ELISA法檢測HK-2上清液中FKN蛋白含量；用AGE-BSA及AGE-BSA加FKN中和抗體分別干預(yù)HK-2，無血清DMEM組和BS

3、A組做為對照，用Transwell小室裝置檢測HK-2趨化單核細胞株U937的功能，用共培養(yǎng)及熒光染色法檢測HK-2粘附U937的功能。
　　 結(jié)果：1、用濃度為50、100、200、400mg.L-1的AGE-BSA分別干預(yù)HK-2 24h，與DMEM組和BSA組(200 mg.L-1)相比，AGE-BSA濃度為100 mg-L-1時，HK-2 FKN的mRNA表達顯著增高(0.904±0.060 vs 0.675±0.039

4、，0.761±0.078)(P<0.05)，HK-2上清液中FKN蛋白分泌也顯著增高(1.613±0.045 vs 0.7604±0.030，0.947±0.025)(P<0.01)，而且隨著AGE-BSA干預(yù)濃度的增高，HK-2 FKN的mRNA表達和蛋白分泌水平進一步增高；2、用濃度為200 mg.L-1的AGE-BSA分別干預(yù)HK-20、12、24、48h，與BSA(200mg.L-1)干預(yù)HK-248h組相比，AGE-BSA干預(yù)

5、24h組的HK-2細胞FKN的mRNA表達顯著增高(0.784±0.056 vs 0.628±0.065)(P<0.05)，而HK-2上清液中FKN的蛋白分泌在AGE-BSA干預(yù)12h組即顯著高于Oh組和對應(yīng)BSA干預(yù)組(1.333±0.071 vs 0.787±0.038，0.797±0.040)(P<0.05)，且隨著干預(yù)時間的延長，HK-2 FKN的mRNA表達和蛋白分泌水平進一步升高；3、AGE-BSA(200mg.L-1)干預(yù)

6、24h后，HK-2趨化的U937細胞數(shù)較DMEM組和BSA組(200mg.L-1)明顯增加(15.83±2.86 vs 0.5±0.55，0.5±0.84)(P<0.01)。在AGE-BSA(200mg.L-1)干預(yù)的基礎(chǔ)上加入FKN抗體后，HK-2趨化的U937細胞數(shù)顯著少于AGE-BSA組(7.83±1.72 vs 15.83±2.86)(P<0.01);4、用AGE-BSA(200mg.L-1)干預(yù)24小時后，HK-2粘附的U93

7、7細胞數(shù)較DMEM組和BSA組(200mg.L-1)明顯增加(20.17±2.32vs 3.17±0.69，3.5±1.05)(P<0.01)。在AGE-BSA(200mg.L-1)干預(yù)的基礎(chǔ)上加入FKN中和抗體后，HK-2粘附的U937細胞數(shù)顯著少于AGE-BSA組(10.17±1.47 vs 20.17±2.32，P<0.01)。
　　 結(jié)論：1、AGEs可促進人腎小管上皮細胞FKN的mRNA表達和蛋白分泌；2、AGEs可增