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1、目的: 通過高糖培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)以探討其對(duì)HK-2表達(dá)NF-кB、RANTES及TGF-β<,1>、Ⅳ型膠原的影響,同時(shí)使用霉酚酸(MPA)進(jìn)行干預(yù),觀察其對(duì)上述細(xì)胞因子表達(dá)的影響,以探討該藥對(duì)高糖環(huán)境中的腎小管細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制。 方法:體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞,按照培養(yǎng)基不同分為3組(1)對(duì)照組(葡萄糖濃度:5.5mmol/l)(2)高糖組(葡萄糖濃度:25mmol/l)(3)MPA+高糖干預(yù)組《MPA濃
2、度為10μmol/l),分別于24h、48h、72h后留取樣本進(jìn)行檢測(cè);使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中RANTES蛋白的分泌情況,RT-PCR法檢測(cè)NF-кBmRNA基因的表達(dá),并用免疫組化法檢測(cè)TGF-β<,1>、Ⅳ型膠原在細(xì)胞內(nèi)的分布及含量。 結(jié)果: 1.HK-2細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)即分泌少量的RANTES,高糖刺激下細(xì)胞分泌的RANTES隨時(shí)間進(jìn)展增加,于48h開始明顯升高,與對(duì)照組相比有顯著差異,72
3、h進(jìn)一步升高;RT-PCR結(jié)果表明高糖環(huán)境中NF-кBmRNA的表達(dá)呈時(shí)間依賴逐步升高,各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比均有顯著增多,高糖組NF-кBmRNA在24h、48h、72h的表達(dá)分別較對(duì)照組升高1.11、2.07、2.41倍; 2.細(xì)胞免疫組化顯示TGF-β<,1>,Ⅳ型膠原主要分布在細(xì)胞胞漿,在高糖刺激下表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增多,并隨時(shí)間延長(zhǎng)增高進(jìn)一步顯著,較對(duì)照組均有明顯差異; 3.MPA干預(yù)后RANTES分泌均較高糖
4、組有顯著減少,48h及72h與高糖組相比均有顯著差異,干預(yù)后的NF-κBmRNA在24h、48h、72h表達(dá)明顯少于高糖組,分別較高糖組減少32.0%、35.4%、39.3%:MPA干預(yù)后TGF-β<,1>,Ⅳ型膠原表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較高糖組也有顯著減少。 結(jié)論: 1.HK-2細(xì)胞在高糖作用下的分泌NF-κB、RANTES顯著高于低糖組,并有明顯的時(shí)間依賴性。 2.HK-2細(xì)胞高糖作用下表達(dá)TGFβ<,1>及Ⅳ膠原
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