高糖對腎小管上皮細胞表達RANTES、TGF-β的影響及霉酚酸干預(yù)研究.pdf

1、目的: 通過高糖培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細胞(HK-2)以探討其對HK-2表達NF-кB、RANTES及TGF-β<,1>、Ⅳ型膠原的影響，同時使用霉酚酸(MPA)進行干預(yù)，觀察其對上述細胞因子表達的影響，以探討該藥對高糖環(huán)境中的腎小管細胞的保護作用機制。 方法：體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞，按照培養(yǎng)基不同分為3組(1)對照組(葡萄糖濃度：5.5mmol/l)(2)高糖組(葡萄糖濃度：25mmol/l)(3)MPA+高糖干預(yù)組《MPA濃

2、度為10μmol/l)，分別于24h、48h、72h后留取樣本進行檢測；使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞上清液中RANTES蛋白的分泌情況，RT-PCR法檢測NF-кBmRNA基因的表達，并用免疫組化法檢測TGF-β<,1>、Ⅳ型膠原在細胞內(nèi)的分布及含量。 結(jié)果： 1．HK-2細胞在基礎(chǔ)狀態(tài)即分泌少量的RANTES，高糖刺激下細胞分泌的RANTES隨時間進展增加，于48h開始明顯升高，與對照組相比有顯著差異，72

3、h進一步升高；RT-PCR結(jié)果表明高糖環(huán)境中NF-кBmRNA的表達呈時間依賴逐步升高，各時間點與對照組相比均有顯著增多，高糖組NF-кBmRNA在24h、48h、72h的表達分別較對照組升高1.11、2.07、2.41倍； 2．細胞免疫組化顯示TGF-β<,1>，Ⅳ型膠原主要分布在細胞胞漿，在高糖刺激下表達的陽性細胞數(shù)顯著增多，并隨時間延長增高進一步顯著，較對照組均有明顯差異； 3．MPA干預(yù)后RANTES分泌均較高糖

4、組有顯著減少，48h及72h與高糖組相比均有顯著差異，干預(yù)后的NF-κBmRNA在24h、48h、72h表達明顯少于高糖組，分別較高糖組減少32.0％、35.4％、39.3％：MPA干預(yù)后TGF-β<,1>，Ⅳ型膠原表達的陽性細胞數(shù)較高糖組也有顯著減少。 結(jié)論： 1．HK-2細胞在高糖作用下的分泌NF-κB、RANTES顯著高于低糖組，并有明顯的時間依賴性。 2．HK-2細胞高糖作用下表達TGFβ<,1>及Ⅳ膠原