高糖對人腎小管上皮細胞骨橋蛋白及其受體表達的影響及霉酚酸的干預研究.pdf

1、目的：觀察高糖培養(yǎng)后人腎小管上皮細胞分泌骨橋蛋白(OPN)和其受體整合素α<,v>、β<,1>以及TGF-β<,1>的表達情況，探討上述細胞因子在糖尿病腎病小管間質(zhì)纖維化中的作用，并應用新型免疫抑制劑霉酚酸(MPA)進行干預，以明確其在體外實驗中對各細胞因子的作用，進一步探討其可能用于治療糖尿病腎病的機制。 方法：體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞(HK-2)，根據(jù)培養(yǎng)基不同，分為四組，A組：低糖培養(yǎng)基：B組：高糖培養(yǎng)基；C組：高糖培養(yǎng)基

2、+10<'-3>mmol/IMPA：D組：高糖培養(yǎng)基+10<'-2>mmol/IMPA，分別在24、48、72小時，用Elisa法檢測各組培養(yǎng)液中OPN的含量，RT-PCR檢測小管細胞中OPN mRNA表達情況，同時進行細胞爬片免疫組化，觀察整合素α<,v>、β<,1>及TGF-β<,1>在小管上皮細胞的表達情況。 結果：高糖培養(yǎng)24小時后培養(yǎng)上清液中OPN表達較低糖組升高，HK-2細胞中OPNmRNA表達也明顯升高，P均<0.

3、05，隨著培養(yǎng)時間的延長OPN及其mRNA表達進一步升高，72小時后培養(yǎng)上清液中OPN表達較低糖組升高4.563倍，HK-2細胞中OPNmRNA表達較低糖組升高3.141倍；免疫組化顯示，高糖培養(yǎng)HK-2細胞，48小時后整合素α<,v>表達陽性細胞百分數(shù)(5.235±0.618)較低糖組(0.686±0.262)明顯增加，TGF-β<,1>表達陽性細胞數(shù)(10.795±1.582)也較低糖組(2.428±0.261)明顯增加，72小時后

4、整合素β<,1>表達陽性細胞數(shù)(10.228±1.282)較低糖組(4.365±0.328)明顯增加，P均<0.05；加入MPA后各組中上調(diào)的細胞因子表達及OPN mRNA均有不同程度下降，P值<0.05，且10<'-2>mmol/1MPA組較10<'-3>mmol/MPA組更能抑制各因子的表達，P值<0.05；相關分析顯示HK-2細胞分泌的OPN、整合素α<,v>、β<,1>及TGF-β<,1>存在顯著正相關，P均<0.05。

5、 結論： 1．高糖誘導人腎小管上皮細胞OPN、整合素α<,v>、β<,1>表達上調(diào)，且相互之間呈顯著正相關，提示DN時小管細胞異常分泌的OPN至少部分是通過與整合素α<,v>、β<,1>等受體結合而發(fā)揮作用。 2．高糖可上調(diào)人腎小管上皮細胞TGF-β<,1>的表達，且TGF-β<,1>與OPN、整合素α<,v>、β<,1>呈顯著正相關，提示DN時上述各因子協(xié)同作用促進DN小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展。 3．霉酚酸對各