雷帕霉素對(duì)HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)以急性早幼粒白血病細(xì)胞 HL-60為研究對(duì)象,探討雷帕霉素對(duì)HL-60細(xì)胞促進(jìn)凋亡的作用及其分子機(jī)制。
　　方法:用MTT比色法測(cè)定雷帕霉素對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響;用倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳觀測(cè)凋亡的梯形條帶;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western-blot檢測(cè)HL-60細(xì)胞經(jīng)雷帕霉素處理后,Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:雷帕霉素呈濃度依賴性抑制H

2、L-60細(xì)胞的生長(zhǎng),且雷帕霉素80nmol/L與全反式維甲酸10nmol/L的抑制效果相當(dāng)。雷帕霉素處理72小時(shí)的HL-60細(xì)胞,經(jīng)光鏡、AO/EB熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積縮小、核固縮等典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳觀測(cè)到:當(dāng)雷帕霉素濃度40 nmol/L時(shí),隱約可見(jiàn)DNA梯形條帶,濃度增至80nmol/L時(shí),DNA梯形條帶清晰。但濃度升至160 nmol/L時(shí),不僅僅有DNA梯形條帶,而且還出現(xiàn)了膜狀的細(xì)胞死亡條帶;

3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)到雷帕霉素80nmol/L對(duì)HL-60細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的作用,且隨著藥物濃度的增加,凋亡率將不再增加。雷帕霉素80nmol/L只有作用到72小時(shí)時(shí)才出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡。Western-blot檢測(cè)結(jié)果:隨著時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡蛋白Bax表達(dá)增加、Bcl-2表達(dá)下降,Bax/Bcl-2比值上調(diào)。
　　結(jié)論:雷帕霉素具有濃度和時(shí)間依賴性抑制白血病細(xì)胞HL-60增殖。雷帕霉素具有促進(jìn)HL-60細(xì)胞凋亡作用,其凋亡機(jī)制可能與Bax