紫杉醇體外誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、紫杉醇(paclitaxel)是一種高效細(xì)胞毒藥物，通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡(apoptosis)而發(fā)揮抗腫瘤的細(xì)胞毒效應(yīng)，它的作用靶點(diǎn)是細(xì)胞骨架的微管系統(tǒng)，影響微管聚合與解聚的動態(tài)平衡，抑制微管蛋白解聚，腫瘤細(xì)胞不能分裂變大，并出現(xiàn)多核細(xì)胞，阻斷細(xì)胞的有絲分裂，細(xì)胞停止在G0期和G2/M期，進(jìn)而引起細(xì)胞的死亡。紫杉醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的因素較多，具體通過哪條細(xì)胞凋亡途徑和與哪些基因相關(guān)，仍沒有一個清晰系統(tǒng)的解釋。目前的研究表明紫杉醇誘導(dǎo)腫瘤

2、細(xì)胞凋亡的機(jī)制與腫瘤的組織來源、細(xì)胞分型、藥物濃度等不同而有很大的差異。紫杉醇誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制已成為抗腫瘤治療的研究熱點(diǎn)之一。 紫杉醇現(xiàn)在廣泛的應(yīng)用于乳腺癌、卵巢癌、膽囊癌、食道癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、膀朧癌、白血病及骨肉瘤的治療等。由于紫杉醇長期應(yīng)用表現(xiàn)出明顯的骨髓抑制，限制了紫杉醇作用于白血病的臨床研究，所以國內(nèi)外對紫杉醇在白血病臨床方面的研究較少。目前國內(nèi)外在該方向的研究主要集中于體外的實(shí)驗(yàn)研究，不同分型的白血病細(xì)胞株對

3、紫杉醇應(yīng)答途徑不盡相同。 本實(shí)驗(yàn)研究紫杉醇對HL-60的生長抑制及誘導(dǎo)凋亡作用，及Bcl-2基因家族參與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用的分子機(jī)制，為臨床應(yīng)用紫杉醇治療白血病，提高白血病對紫杉醇的藥物敏感性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。將不同濃度的紫杉醇作用于人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60，光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、流式細(xì)胞儀分析檢測細(xì)胞凋亡比率、DNA凝膠電泳檢測DNA片段化、RT-PCR及蛋白免疫印跡方法檢測Bcl-2家族蛋白的改變。 結(jié)果：

4、 1)紫杉醇體外可直接作用于HL-60細(xì)胞，誘導(dǎo)其的發(fā)生細(xì)胞凋亡，呈明顯的劑量依賴性。 2)10-7mol/L紫杉醇作用HL-60細(xì)胞24h，DNA表現(xiàn)出明顯的片段化，即可誘導(dǎo)明顯的晚期細(xì)胞凋亡。 3)不同濃度的紫杉醇作用HL-60細(xì)胞后，Bad表達(dá)明顯上調(diào)；Bcl-2表達(dá)明顯下調(diào)。Bax基因和Bcl-xl基因有表達(dá)但無明顯變化。說明Bcl-2家族蛋白參與了紫杉醇誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡。 以上結(jié)果說