Bim在紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡中的作用.pdf

1、背景及目的：胃癌是我國常見的惡性腫瘤，嚴重威脅著人類的健康。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞對化療藥物的不敏感性與抵抗細胞凋亡的分子機制有關。紫杉醇是一種廣譜抗腫瘤藥物被用于人類腫瘤的治療，它是一種作用微管的化療藥物，其作用機理是使細胞內微管結構形成穩(wěn)定的復合物，使腫瘤細胞停滯于G2/M期，進而起到殺傷腫瘤的作用。此外有報道稱：微管化療藥物治療實體腫瘤中，通過破壞細胞骨架將BH3-only亞家族成員中Bim分子激活，活化的Bim分子從微管蛋白馬達蛋白復

2、合體中釋放出來發(fā)揮殺傷腫瘤細胞的作用，因此抗微管化療藥物治療實體瘤中Bim被認為發(fā)揮了重要的調節(jié)作用。課題的前期研究中發(fā)現(xiàn)，紫杉醇能通過誘導細胞凋亡殺傷胃腺癌細胞，且BH3-only亞家族成員中的Bim分子在此凋亡過程中出現(xiàn)表達上調以及移位。在前期研究的基礎上，本實驗中將Bim作為分子靶點，采用siRNA技術特異性“沉默”Bim基因的表達，探討B(tài)H3-only亞家族成員在紫杉醇誘導胃腺癌細胞中的作用機制和Bim在紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡

3、中發(fā)揮的作用，進一步探索抗微管化療藥物紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡的分子通路，這也將有助于闡明胃腺癌細胞對抗微管化療藥物抵抗的生物學基礎，以尋找克服腫瘤細胞對凋亡抵抗的有效途徑。 方法：采用不同濃度的紫杉醇不同時間處理體外培養(yǎng)的SGC-7901、BGC-823胃腺癌細胞。PI單染流式細胞儀檢測紫杉醇誘導的細胞凋亡水平；采用廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk和Western blot檢測在紫杉醇誘導的胃腺癌細胞凋亡中是否依賴于

4、easpases；JC-l染色檢測線粒體膜電位在紫杉醇誘導的胃腺癌細胞凋亡中的變化；Western blot檢測BH3-only亞家族成員在紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡中的作用；siRNA技術沉默Bim基因的表達，Westernblot檢測Bim的“沉默”效率；采用PI單染流式細胞儀檢測siRNA“沉默”Bim后對紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡率的影響 結果：紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡具有劑量和時間依賴性。SGC-790l胃腺癌細胞對紫杉醇

5、較敏感，而BGC-823胃腺癌細胞對紫杉醇誘導的凋亡具有相對抵抗性。廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk能有效抑制紫杉醇誘導的胃腺癌細胞凋亡；caspase-3，-9在紫杉醇誘導的胃腺癌細胞中被活化，紫杉醇誘導的的胃腺癌細胞凋亡依賴于caspases。隨著紫杉醇作用時間的延長線粒體膜電位出現(xiàn)降低趨勢，提示紫杉醇誘導的胃腺癌細胞凋亡依賴線粒體凋亡途徑。BH3-only亞家族成員Bim表達增高，Bcl-2家族成員中的抗凋亡蛋白Bcl-