Bim在紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、背景及目的：胃癌是我國常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的健康。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的不敏感性與抵抗細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制有關(guān)。紫杉醇是一種廣譜抗腫瘤藥物被用于人類腫瘤的治療，它是一種作用微管的化療藥物，其作用機(jī)理是使細(xì)胞內(nèi)微管結(jié)構(gòu)形成穩(wěn)定的復(fù)合物，使腫瘤細(xì)胞停滯于G2/M期，進(jìn)而起到殺傷腫瘤的作用。此外有報(bào)道稱：微管化療藥物治療實(shí)體腫瘤中，通過破壞細(xì)胞骨架將BH3-only亞家族成員中Bim分子激活，活化的Bim分子從微管蛋白馬達(dá)蛋白復(fù)

2、合體中釋放出來發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，因此抗微管化療藥物治療實(shí)體瘤中Bim被認(rèn)為發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。課題的前期研究中發(fā)現(xiàn)，紫杉醇能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺傷胃腺癌細(xì)胞，且BH3-only亞家族成員中的Bim分子在此凋亡過程中出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)以及移位。在前期研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)中將Bim作為分子靶點(diǎn)，采用siRNA技術(shù)特異性“沉默”Bim基因的表達(dá)，探討B(tài)H3-only亞家族成員在紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞中的作用機(jī)制和Bim在紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡

3、中發(fā)揮的作用，進(jìn)一步探索抗微管化療藥物紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡的分子通路，這也將有助于闡明胃腺癌細(xì)胞對(duì)抗微管化療藥物抵抗的生物學(xué)基礎(chǔ)，以尋找克服腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡抵抗的有效途徑。 方法：采用不同濃度的紫杉醇不同時(shí)間處理體外培養(yǎng)的SGC-7901、BGC-823胃腺癌細(xì)胞。PI單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平；采用廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk和Western blot檢測(cè)在紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡中是否依賴于

4、easpases；JC-l染色檢測(cè)線粒體膜電位在紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡中的變化；Western blot檢測(cè)BH3-only亞家族成員在紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡中的作用；siRNA技術(shù)沉默Bim基因的表達(dá)，Westernblot檢測(cè)Bim的“沉默”效率；采用PI單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)siRNA“沉默”Bim后對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡率的影響 結(jié)果：紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡具有劑量和時(shí)間依賴性。SGC-790l胃腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇

5、較敏感，而BGC-823胃腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)的凋亡具有相對(duì)抵抗性。廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk能有效抑制紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡；caspase-3，-9在紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞中被活化，紫杉醇誘導(dǎo)的的胃腺癌細(xì)胞凋亡依賴于caspases。隨著紫杉醇作用時(shí)間的延長線粒體膜電位出現(xiàn)降低趨勢(shì)，提示紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡依賴線粒體凋亡途徑。BH3-only亞家族成員Bim表達(dá)增高，Bcl-2家族成員中的抗凋亡蛋白Bcl-