Bcl-2在紫杉醇耐藥胃腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景及目的:胃癌是我國常見的惡性腫瘤,化療是胃癌患者治療的主要手段之一。紫杉醇作為胃癌化療的一線藥物,因其在臨床初始化療緩解后常產(chǎn)生耐藥性,嚴(yán)重影響患者治療效果,成為限制紫杉醇臨床應(yīng)用的重要因素。近年來,大量通過建立紫杉醇耐藥的腫瘤細(xì)胞株探討紫杉醇耐藥機(jī)制的研究表明:P-糖蛋白、微管β亞基和α亞基表達(dá)的改變,以及凋亡途徑中相關(guān)分子的表達(dá)異常均與紫杉醇耐藥性有關(guān)。Bcl-2家族中的抗凋亡蛋白被認(rèn)為在腫瘤化療藥耐藥中發(fā)揮重要作用。本研究旨在

2、通過探討 Bcl-2蛋白在紫杉醇耐藥的胃腺癌細(xì)胞中的作用,更好的了解胃腺癌細(xì)胞耐藥的分子機(jī)制,以尋找克服腫瘤細(xì)胞耐藥的有效途徑。
　　方法:采用藥物濃度梯度遞增持續(xù)作用法建立耐紫杉醇SGC-7901/TAX細(xì)胞株。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察耐藥株SGC-7901/TAX的形態(tài)學(xué)變化。采用不同濃度紫杉醇在不同時(shí)間點(diǎn)處理SGC-7901與SGC-7901/TAX細(xì)胞株。通過PI染色法流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。通過MTT比色法檢測細(xì)胞生存率變化

3、。通過Western blot檢測XIAP、CIAP1、CIAP2、mcl-1、Bax、Bcl-2、Bcl-xl的蛋白變化。通過RT-PCR法檢測Bcl-2 mRNA水平的變化。SiRNA沉默Bcl-2基因后,Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后Bcl-2蛋白水平的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率的變化,MTT比色法檢測生存率變化。
　　結(jié)果:耐紫杉醇胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901/TAX較胃腺癌細(xì)胞系 SGC-7901有明顯的形態(tài)差異,

4、耐藥細(xì)胞株形態(tài)不規(guī)則,體積較親本細(xì)胞株稍大,可見瘤巨細(xì)胞和凹陷。紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡具有時(shí)間和劑量相關(guān)性,耐藥胃腺癌細(xì)胞株對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)的凋亡不敏感,紫杉醇處理后Western blot檢測到耐藥細(xì)胞株中有Bcl-2的上調(diào),親本細(xì)胞株Bcl-2則表達(dá)下調(diào)。半定量PCR檢測耐藥胃腺癌細(xì)胞株中Bcl-2 mRNA水平也是上調(diào)的;在耐藥胃癌細(xì)胞株中沉默Bcl-2后,Bcl-2蛋白水平下調(diào),細(xì)胞凋亡率明顯上升,細(xì)胞生存率顯著下降。