雌激素受體α66介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇耐藥的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一。美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)研究表明,乳腺癌已成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,死亡率僅次于肺癌居第二位。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,近些年來(lái)乳腺癌發(fā)病率已位居女性惡性腫瘤首位。如何有效提高乳腺癌綜合治療效果,降低發(fā)病率和死亡率,已成為當(dāng)前乳腺癌研究重點(diǎn)之一。
　　 乳腺癌組織中雌激素受體(Estrogen receptor,ER)的狀態(tài)被廣泛認(rèn)為是預(yù)測(cè)患者對(duì)內(nèi)分泌治療反應(yīng)性和預(yù)后的關(guān)鍵指標(biāo)之一。雌激素受體主要有兩個(gè)

2、亞型,即Erα和Erβ。由于剪切異構(gòu)體的存在,ER66尚有三個(gè)亞型,即ERα66,ERα46和ERα36,其中ERα66即為通常所說(shuō)的Erα,也簡(jiǎn)稱為ER66。大量臨床試驗(yàn)和回顧性研究都表明ER66陽(yáng)性的乳腺癌患者對(duì)化療的反應(yīng)性不如陰性患者敏感,ER66可能影響乳腺癌患者化療的有效性。紫杉醇是乳腺癌化療最有效的藥物之一,近些年來(lái)大量的臨床試驗(yàn)表明ER66可能影響乳腺癌患者對(duì)紫杉醇的敏感性。
　　 本課題研究了轉(zhuǎn)染ER66(BC-

3、ER)和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(BC-V)的乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性的差異及可能機(jī)制。具體內(nèi)容如下:
　　 1.乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
　　 我們將pcDNA3.1-ER66和pcDNA3.1空載體轉(zhuǎn)入ER66-的Bcap37乳腺癌細(xì)胞,進(jìn)行RT-PCR和Western-blot鑒定,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,即轉(zhuǎn)染ER66的BC-ER細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體的BC-V細(xì)胞。
　　 2.BC-ER和BC-V乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性差異的研究

4、r>　　 以建立的同源細(xì)胞模型(BC-ER和BC-V細(xì)胞)為基礎(chǔ)來(lái)研究ER66的表達(dá)對(duì)紫杉醇敏感性的影響。用MTT法和流式PI染死細(xì)胞法檢測(cè)BC-ER(轉(zhuǎn)染ER66)和BC-V(轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒)細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在E2作用下BC-ER細(xì)胞較BC-V細(xì)胞對(duì)紫杉醇耐藥。
　　 3.BC-ER和BC-V乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性差異的機(jī)制研究(1)細(xì)胞增殖速度在BC-ER和BC-V乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性差異中的作用研究<

5、br>　　 化療敏感性和細(xì)胞增殖速度有一定關(guān)系,增殖慢的細(xì)胞對(duì)化療耐藥。MTT結(jié)果提示E2可以抑制BC-ER細(xì)胞的增殖活力,我們進(jìn)一步檢測(cè)了BC-ER和BC-V在E2作用下細(xì)胞周期和周期蛋白D1的表達(dá)變化,結(jié)果提示,在BC-ER細(xì)胞,E2作用下G2/S期細(xì)胞減少,周期蛋白D1表達(dá)下調(diào),提示E2作用可抑制BC-ER細(xì)胞的增殖速度。推測(cè)BC-ER細(xì)胞在E2作用下細(xì)胞增殖速度的減慢可能對(duì)紫杉醇耐藥有一定的影響。
　　 (2)細(xì)胞凋亡

6、通路在BC-ER和BC-V乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇耐藥差異中的作用研究
　　 BC-ER和BC-V乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性差異的研究表明Bcap37細(xì)胞表達(dá)ER66后可降低其對(duì)紫杉醇的敏感性,接下來(lái)我們檢測(cè)了ER66在紫杉醇誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡中的可能作用。用Western-blot檢測(cè)兩種細(xì)胞在紫杉醇作用下凋亡蛋白caspase3的表達(dá)差異,結(jié)果表明在BC-ER細(xì)胞E2作用下可以抑制紫杉醇誘導(dǎo)的caspase3酶原活化裂解,而轉(zhuǎn)染空載

7、體的BC-V細(xì)胞沒有此變化,也就是說(shuō)在BC-ER細(xì)胞ER66可以通過caspase3途徑抑制紫杉醇的促凋亡作用。在具體機(jī)制上,我們用Western-blot檢測(cè)了凋亡信號(hào)通路蛋白NF-κB/Iκ-Bα,JNK和AKT的表達(dá)及磷酸化狀態(tài)的變化。
　　 結(jié)果提示,紫杉醇作用下可以引起B(yǎng)C-ER和BC-V細(xì)胞Iκ-Bα磷酸化降解。而在轉(zhuǎn)染ER66的BC-ER細(xì)胞,E2可抑制紫杉醇誘導(dǎo)的Iκ-Bα磷酸化降解,在轉(zhuǎn)染空載的BC-V細(xì)胞沒有