紫杉醇脂質(zhì)體對乳腺癌及卵巢癌細胞生長抑制作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的:分析紫杉醇脂質(zhì)體對乳腺癌MCF-7細胞及卵巢癌SKOV-3細胞的生長抑制作用,觀察藥物作用的時間濃度關(guān)系,探究藥物作用機制,從而為臨床應(yīng)用紫杉醇脂質(zhì)體治療乳腺癌及卵巢癌提供基礎(chǔ)證實。
　　 方法:本研究以人乳腺癌MCF-7細胞系及卵巢癌SKOV-3細胞系為研究對象,應(yīng)用不同劑量紫杉醇脂質(zhì)體對MCF-7及SKOV-3細胞進行處理,在不同作用時間后采用MTT比色法從細胞學(xué)水平分析紫杉醇脂質(zhì)體對腫瘤細胞生長抑制作用的時間濃度關(guān)系

2、,通過流式細胞術(shù)了解其對腫瘤細胞的促凋亡作用及其對細胞周期的阻滯狀態(tài),并應(yīng)用western-blot技術(shù)分析藥物作用后腫瘤細胞bcl-2及bax蛋白表達的變化情況以探究其可能的藥物作用機制。
　　 結(jié)果:
　　 1.MCF-7、SKOV-3細胞在96孔板的最適種植密度為4×104/ml。
　　 2.在種植密度相同的情況下,MCF-7細胞較SKOV-3細胞增長快,二者均呈現(xiàn)S形生長曲線。孵育2天后,兩系細胞均可進入

3、對數(shù)生長期,選擇此時進行加藥實驗。
　　 3.由MTT篩選紫杉醇脂質(zhì)體作用濃度和時間,發(fā)現(xiàn)其對MCF-7及SKOV-3細胞有明顯的劑量.時間依賴效應(yīng)。同一濃度的紫杉醇脂質(zhì)體,隨著用藥時間的延長,對細胞的抑制率逐漸增加；在相同作用時間下,隨著藥物濃度增加,其對細胞抑制率也逐漸增加。篩選出1μg/ml、5μg/ml、20μg/ml三個濃度,24、48小時兩個作用時間。
　　 4.倒置顯微鏡細胞形態(tài)學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)正常MCF-7及

4、SKOV-3細胞呈多邊形,貼壁生長,繁殖速度快:細胞飽滿、胞膜完整、邊界清晰。加紫杉醇脂質(zhì)體后,隨著孵育時間的延長以及藥物濃度的增大,細胞形態(tài)學(xué)發(fā)生如下變化:細胞邊界變圓,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡、細胞膜邊界不清、胞膜破裂、細胞溶解死亡。
　　 5.流式細胞儀分析細胞周期實驗,結(jié)果顯示,紫杉醇與紫杉醇脂質(zhì)體均可將MCF-7與SKOV-3細胞阻滯在G2/M期,加藥后G0/G1期、S期細胞明顯減少,相同濃度、相同作用時間下,兩種藥物對細胞周期

5、阻滯之間無統(tǒng)計學(xué)差異。改變藥物作用濃度及作用時間,細胞阻滯周期不會改變,仍為G2/M期；且隨著藥物濃度增加、作用時間延長,阻滯逐漸明顯。
　　 6.流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡實驗,可見隨藥物濃度增加,凋亡細胞所占比例逐漸增加。應(yīng)用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)同一濃度藥物作用下,隨藥物作用時間延長,抑制率增加,24小時和48小時之間結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。相同作用時間下,不同濃度藥物作用之間結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。在藥

6、物濃度、作用時間一致的情況下,紫杉醇與紫杉醇脂質(zhì)體對細胞的抑制之間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 7.通過Western-blot方法發(fā)現(xiàn):紫杉醇脂質(zhì)體作用后MCF-7和SKOV-3細胞bcl-2蛋白表達明顯下降,bax蛋白表達明顯上調(diào),bax/bal-2比例明顯上調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 1.經(jīng)基礎(chǔ)實驗研究得出紫杉醇以脂質(zhì)體為轉(zhuǎn)運載體后,并未改變其對人乳腺癌MCF-7和卵巢癌SKOV-3細胞的抑制作用,具有明顯的劑量-時