吡羅昔康對乳腺癌細(xì)胞聲動力抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一節(jié)吡羅昔康聲動力作用對乳腺癌細(xì)胞的急性毒性實驗研究 目的：觀察吡羅昔康聲動力效應(yīng)對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的急性細(xì)胞毒作用。 方法：采用MTT比色法檢測單純超聲和聲敏劑吡羅昔康對MDA-MB-231的細(xì)胞毒作用，并以此確定聲照參數(shù)(O.5W/cm2×30s)和吡羅昔康劑量(0.2mmol/L)，觀察吡羅昔康聲動力效應(yīng)對MDA-MB-23l細(xì)胞的急性殺傷作用，透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)改變，并進(jìn)一步應(yīng)用MTT比色

2、法觀察活性氧清除劑對吡羅昔康聲動力作用的影響。 結(jié)果：單純超聲和一定濃度的吡羅昔康對MDA-MB-231均有明顯的細(xì)胞毒作用。當(dāng)固定聲強(qiáng)為0.5W/cm2，輻照時間為10s、30s和60s時，細(xì)胞存活率分別為89.45％、55.78％和31.65％；當(dāng)吡羅昔康濃度大于0.3mmol／L時，就表現(xiàn)出明顯的抑制效應(yīng)，而且濃度越大，抑制作用越明顯。而吡羅昔康介導(dǎo)的聲動力作用對MDA-MB-231細(xì)胞的急性殺傷效應(yīng)更顯著，細(xì)胞存活率明顯

3、低于相應(yīng)單純超聲組和對照組。透射電鏡可見MDA-MB-231細(xì)胞微絨毛減少，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，胞漿內(nèi)大小不一空泡形成，線粒體髓樣變，核內(nèi)假性包含體，核周隙增大，胞膜破裂、胞質(zhì)流失，核碎裂、溶解等改變。單線態(tài)氧清除劑組氨酸能夠顯著抑制吡羅昔康聲動力效應(yīng)對MDA-MB-231細(xì)胞的即刻殺傷作用，而羥自由基捕獲劑甘露醇對其無明顯影響。 結(jié)論：吡羅昔康介導(dǎo)的聲動力作用可直接破壞人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-23l的超微結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞壞死

4、，細(xì)胞存活率下降。吡羅昔康聲動力作用對MDA-MB-231細(xì)胞的殺傷效應(yīng)可能與聲動力作用后產(chǎn)生的單線態(tài)氧等活性氧物質(zhì)有關(guān)。 第二節(jié)吡羅昔康聲動力作用對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影 響及其機(jī)制研究 目的：從細(xì)胞增殖和凋亡兩方面觀察吡羅昔康聲動力效應(yīng)對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的遲發(fā)抑制作用，并初步探討其作用機(jī)制。 方法：通過MTT比色法檢測吡羅昔康聲動力作用后人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231

5、的增殖能力，采用TUNEL法、AO/EB雙染法和流式細(xì)胞儀(FCM)檢測吡羅昔康聲動力作用對MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響，并進(jìn)一步通過FCM分析吡羅昔康聲動力作用后MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)線粒體跨膜電位(MMP)及活性氧(ROS)水平的變化。 結(jié)果：吡羅昔康聲動力效應(yīng)和單純超聲作用均能明顯降低MDA-MB-231細(xì)胞的增殖代謝活性而抑制其增殖，但是前者作用更顯著，這兩組之間比較，差異具有顯著性意義(P＜0．01)，而該劑

6、量吡羅昔康對MDA-MB-23l細(xì)胞的增殖能力無明顯影響。吡羅昔康聲動力組和單純超聲組均可見數(shù)量不等的凋亡細(xì)胞，以前者為著，而對照組基本未見凋亡細(xì)胞。其中AO/EB染色早期凋亡細(xì)胞核呈綠色固縮或碎裂狀，晚期凋亡細(xì)胞核著橘紅色且濃聚或偏向，壞死細(xì)胞呈紅色熒光，輪廓不清；TUNEL法染色凋亡細(xì)胞核呈棕褐色。FCM定量分析結(jié)果表明各組細(xì)胞凋亡率分別為：對照組(4.70±0.46)％、單純超聲組(19.90±1.65)％、吡羅昔康聲動力組(29

7、.874±1.79)％，其中以吡羅昔康聲動力組凋亡率最高，約為單純超聲組的1.5倍(P＜0．05)。吡羅昔康聲動力作用后，MDA-MB-23l細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯高于單純超聲組和對照組，MMP顯著低于這二者，各組兩兩比較，差異均具有顯著性意義(P＜0．05)。 結(jié)論：吡羅昔康介導(dǎo)的聲動力作用不僅能顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖，還能有效誘導(dǎo)其凋亡。吡羅昔康聲動力作用使MDA-MB-231細(xì)胞增殖明顯受抑，可能與聲動力作用后