吡羅昔康對乳腺癌細胞聲動力抑制作用及其機制研究.pdf

1、第一節(jié)吡羅昔康聲動力作用對乳腺癌細胞的急性毒性實驗研究 目的：觀察吡羅昔康聲動力效應對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231的急性細胞毒作用。 方法：采用MTT比色法檢測單純超聲和聲敏劑吡羅昔康對MDA-MB-231的細胞毒作用，并以此確定聲照參數(shù)(O.5W/cm2×30s)和吡羅昔康劑量(0.2mmol/L)，觀察吡羅昔康聲動力效應對MDA-MB-23l細胞的急性殺傷作用，透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)改變，并進一步應用MTT比色

2、法觀察活性氧清除劑對吡羅昔康聲動力作用的影響。 結(jié)果：單純超聲和一定濃度的吡羅昔康對MDA-MB-231均有明顯的細胞毒作用。當固定聲強為0.5W/cm2，輻照時間為10s、30s和60s時，細胞存活率分別為89.45％、55.78％和31.65％；當吡羅昔康濃度大于0.3mmol／L時，就表現(xiàn)出明顯的抑制效應，而且濃度越大，抑制作用越明顯。而吡羅昔康介導的聲動力作用對MDA-MB-231細胞的急性殺傷效應更顯著，細胞存活率明顯

3、低于相應單純超聲組和對照組。透射電鏡可見MDA-MB-231細胞微絨毛減少，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，胞漿內(nèi)大小不一空泡形成，線粒體髓樣變，核內(nèi)假性包含體，核周隙增大，胞膜破裂、胞質(zhì)流失，核碎裂、溶解等改變。單線態(tài)氧清除劑組氨酸能夠顯著抑制吡羅昔康聲動力效應對MDA-MB-231細胞的即刻殺傷作用，而羥自由基捕獲劑甘露醇對其無明顯影響。 結(jié)論：吡羅昔康介導的聲動力作用可直接破壞人乳腺癌細胞株MDA-MB-23l的超微結(jié)構(gòu)，導致細胞壞死

4、，細胞存活率下降。吡羅昔康聲動力作用對MDA-MB-231細胞的殺傷效應可能與聲動力作用后產(chǎn)生的單線態(tài)氧等活性氧物質(zhì)有關(guān)。 第二節(jié)吡羅昔康聲動力作用對乳腺癌細胞增殖和凋亡的影 響及其機制研究 目的：從細胞增殖和凋亡兩方面觀察吡羅昔康聲動力效應對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231的遲發(fā)抑制作用，并初步探討其作用機制。 方法：通過MTT比色法檢測吡羅昔康聲動力作用后人乳腺癌細胞株MDA-MB-231

5、的增殖能力，采用TUNEL法、AO/EB雙染法和流式細胞儀(FCM)檢測吡羅昔康聲動力作用對MDA-MB-231細胞凋亡的影響，并進一步通過FCM分析吡羅昔康聲動力作用后MDA-MB-231細胞內(nèi)線粒體跨膜電位(MMP)及活性氧(ROS)水平的變化。 結(jié)果：吡羅昔康聲動力效應和單純超聲作用均能明顯降低MDA-MB-231細胞的增殖代謝活性而抑制其增殖，但是前者作用更顯著，這兩組之間比較，差異具有顯著性意義(P＜0．01)，而該劑

6、量吡羅昔康對MDA-MB-23l細胞的增殖能力無明顯影響。吡羅昔康聲動力組和單純超聲組均可見數(shù)量不等的凋亡細胞，以前者為著，而對照組基本未見凋亡細胞。其中AO/EB染色早期凋亡細胞核呈綠色固縮或碎裂狀，晚期凋亡細胞核著橘紅色且濃聚或偏向，壞死細胞呈紅色熒光，輪廓不清；TUNEL法染色凋亡細胞核呈棕褐色。FCM定量分析結(jié)果表明各組細胞凋亡率分別為：對照組(4.70±0.46)％、單純超聲組(19.90±1.65)％、吡羅昔康聲動力組(29

7、.874±1.79)％，其中以吡羅昔康聲動力組凋亡率最高，約為單純超聲組的1.5倍(P＜0．05)。吡羅昔康聲動力作用后，MDA-MB-23l細胞內(nèi)ROS水平明顯高于單純超聲組和對照組，MMP顯著低于這二者，各組兩兩比較，差異均具有顯著性意義(P＜0．05)。 結(jié)論：吡羅昔康介導的聲動力作用不僅能顯著抑制MDA-MB-231細胞增殖，還能有效誘導其凋亡。吡羅昔康聲動力作用使MDA-MB-231細胞增殖明顯受抑，可能與聲動力作用后