多烯紫杉醇抗乳腺癌作用機(jī)理的研究.pdf

1、目的： 多烯紫杉醇以其高度的活性、確切的療效、可耐受的毒性反應(yīng)，成為乳腺癌化療中的重要藥物之一。然而，多烯紫杉醇在乳腺癌的治療中還有許多問(wèn)題有待解決，如多烯紫杉醇最佳給藥劑量、間隔，多烯紫杉醇與其他藥物及療法的最佳聯(lián)合方式等。進(jìn)行體外多烯紫杉醇對(duì)人乳腺腫瘤Bcap37細(xì)胞株作用機(jī)理的研究，希冀為該藥臨床治療乳腺癌尋找合理劑量強(qiáng)度、劑量密度以及與其他藥物、療法的合理聯(lián)用提供理論依據(jù)。 方法： 1.多烯紫杉醇對(duì)體外培

2、養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用與細(xì)胞形態(tài)觀察 用MTT法測(cè)定濃度為0、0.1、0.5、1、5、10、50、100μmol/L的多烯紫杉醇處理Bcap37細(xì)胞株72小時(shí)后的抑制率，以及濃度為10μmol/L多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株24、48、72小時(shí)后的抑制率。倒置顯微鏡下每日觀察上述培養(yǎng)板對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)變化，以及濃度為5、10μmol/L多烯紫杉醇在培養(yǎng)瓶中孵育Bcap37細(xì)胞株72小時(shí)后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。

3、 2.多烯紫杉醇誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡的研究 2.1DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)濃度為1μmol/L、10μmol/L多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株72小時(shí)后的DNA分解的“梯狀帶”。 2.2TUNEL法檢測(cè)濃度為0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株72小時(shí)后，DNA斷段游離的3-OH'。 2.3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)濃度為0.1、0.5、1、5、10μmo

4、l/L的多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株72小時(shí)的凋亡率，檢測(cè)濃度為10μmol/L的多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株24、48、72小時(shí)的凋亡率并繪制細(xì)胞活度圖。 2.4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)濃度為10μmol/L的多烯紫杉醇作用Bcap37細(xì)胞株24、48、72小時(shí)后各期細(xì)胞比例，并作DNA倍體圖。 結(jié)果： 1.多烯紫杉醇對(duì)人乳腺腫瘤Bcap37細(xì)胞株增殖的抑制作用 多烯紫杉醇對(duì)人乳腺腫瘤Bcap37細(xì)胞株

5、的增殖有明顯抑制作用，抑制率呈時(shí)間—濃度依賴(lài)性。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，高濃度(≥50μmol/L)實(shí)驗(yàn)組24小時(shí)即可見(jiàn)到部分細(xì)胞破裂死亡，72小時(shí)大部分細(xì)胞破裂死亡。低濃度(≤10μmol/L)實(shí)驗(yàn)組隨藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)、藥物濃度的升高，細(xì)胞折光性逐漸減弱，細(xì)胞內(nèi)顆粒樣物逐漸增多，可見(jiàn)到細(xì)胞脫落凋亡小體以及已脫落的凋亡小體。 2.多烯紫杉醇誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡的作用 DNA瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)典型的“梯狀帶”。TUNEL法觀察到

6、藥物處理組細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。細(xì)胞凋亡率(≤10μmol/L)呈時(shí)間—濃度依賴(lài)性。細(xì)胞活度圖顯示藥物處理組24小時(shí)即有相當(dāng)數(shù)量的凋亡細(xì)胞，少量的死亡細(xì)胞，隨時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡、死亡細(xì)胞數(shù)量均逐漸增多。藥物處理組24、48、72小時(shí)的G2期細(xì)胞比例與對(duì)照組相比明顯增加，但藥物處理組72小時(shí)的G2期比例較24、48小時(shí)有明顯降低；而24、48小時(shí)藥物處理組G1期細(xì)胞比例與對(duì)照組相比明顯降低，但72小時(shí)藥物組的G1期細(xì)胞比例較對(duì)照組大。藥物處理

7、組24、48、72小時(shí)后，S期細(xì)胞比例均較對(duì)照組明顯降低。 結(jié)論： 多烯紫杉醇對(duì)人乳腺腫瘤Bcap37細(xì)胞株的增殖有明顯的抑制作用，其抑制作用具有時(shí)間-濃度依賴(lài)性。高濃度多烯紫杉醇(≥50μmol/L)可直接殺傷乳腺Bcap37細(xì)胞株導(dǎo)致其死亡；低濃度(≤10μmol/L)多烯紫杉醇對(duì)乳腺腫瘤Bcap37細(xì)胞的抑制作用主要通過(guò)誘導(dǎo)其凋亡實(shí)現(xiàn)，凋亡率具有時(shí)間-濃度依賴(lài)性。多烯紫杉醇通過(guò)G2/M期阻滯誘導(dǎo)Bcap37細(xì)胞凋亡