OSTP增強(qiáng)紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：前期工作中我們首次篩選和鑒定出卵巢癌特異性結(jié)合肽（Ovarian cancer specific targeting peptide, OSTP），本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究OSTP聯(lián)合紫杉醇對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響及其機(jī)制。將對(duì)探討和開發(fā)OSTP作為靶向化療增敏劑治療卵巢癌奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：體外培養(yǎng)卵巢癌A2780細(xì)胞，隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組（1640和DMSO組）、OSTP組、紫杉醇組和OSTP聯(lián)合紫杉醇組；采用

2、四甲基偶氮唑鹽（MTT法）檢測(cè)OSTP對(duì)A2780細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其IC50值；用Annexin-V-FITC和PI雙染法標(biāo)記 A2780細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；通過磷酸化蛋白芯片檢測(cè)信號(hào)通路中蛋白的磷酸化水平變化情況；并用Western Blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究信號(hào)通路中磷酸化蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示：不同濃度(0.01、0.1、1、10、100umol/L)的OSTP作用于卵巢癌A2780細(xì)

3、胞時(shí)，其抑制率分別是27.36％、32.68%、36.08%、40.77%、57.32%。與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)， OSTP的IC50值為78.18umol/L。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)：不同濃度的OSTP（20、40、80、160、320umol/L）對(duì)A2780細(xì)胞的凋亡率分別為7.88%、8.35%、8.73%、9.39%、10.68%，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示OSTP可誘導(dǎo)

4、細(xì)胞凋亡，凋亡作用不是很強(qiáng)。OSTP和紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用，即分別在OSTP80umol/L0h、3h、6h、12h后再加紫杉醇10umol/L作用于卵巢癌A2780細(xì)胞48h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率分別是39.40%、53.09%、48.18%和45.62%，均高于OSTP和紫杉醇單獨(dú)用藥及兩者的凋亡率相加值，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，提示OSTP能增強(qiáng)紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌 A2780細(xì)胞凋亡的作用。磷酸化蛋白芯片檢測(cè)OSTP聯(lián)合紫杉醇

5、誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡中蛋白磷酸化水平的情況。共篩選出42個(gè)差異磷酸化位點(diǎn)，31個(gè)差異蛋白。其中有11個(gè)蛋白的磷酸化水平上調(diào)，23個(gè)蛋白的磷酸化水平下調(diào)。Western Blot進(jìn)一步研究了其中PI3K/Akt信號(hào)通路的兩個(gè)差異磷酸化蛋白(FoxO1/3/4、14-3-3zeta/delta)的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OSTP組、紫杉醇組FoxO1/3/4磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01）；與OSTP組、紫杉醇組相比

6、，聯(lián)合用藥組中的FoxO1/3/4磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組相比，OSTP組、紫杉醇組14-3-3zeta/delta磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01）；與OSTP組、紫杉醇組相比，聯(lián)合用藥組中的14-3-3zeta/delta磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01）；差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1. OSTP能增強(qiáng)紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用。