OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780細(xì)胞生長的研究.pdf

1、目的：在前期實(shí)驗(yàn)研究中，本課題組的研究人員利用體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)首次篩選得到了卵巢癌特異性結(jié)合肽（ovarian cancer specific targeting peptide，OSTP），并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步將OSTP與順鉑（cis-Dichlorodiamineplatinum，DDP）進(jìn)行耦聯(lián)，研究該耦聯(lián)物（OSTP-DDP）對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞的靶向抑制作用。為探索和研究新的腫瘤分子靶向藥物奠定基礎(chǔ)。

2、　　方法：OSTP-DDP化學(xué)合成；體外培養(yǎng)卵巢癌A2780細(xì)胞；CCK-8法（Cell Counting Kit-8）檢測OSTP-DDP對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞的生長抑制作用，并計(jì)算其IC50值；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測OSTP-DDP對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞的生長抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測OSTP-DDP對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞的周期和凋亡的影響；高效液相色譜分析(HPLC)檢測OSTP-DDP進(jìn)入卵巢癌A2780細(xì)胞的量；建立卵巢癌A278

3、0細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分成4組（空白組、DMSO組、DDP組和OSTP-DDP組），驗(yàn)證OSTP-DDP的體內(nèi)靶向抑瘤作用；檢測裸鼠血常規(guī)和生化常規(guī)，觀察OSTP-DDP的全身毒副作用。
　　結(jié)果：
　　1、從質(zhì)譜分析(MS)和高效液相色譜(HPLC)分析中得出，OSTP-DDP合成成功。
　　2、體外CCK-8法表明分別用不同濃度的OSTP-DDP與DDP（10、20、40、80、160、320μmolL-1）

4、處理A2780細(xì)胞24h、48h、72h后均可抑制A2780細(xì)胞的生長，并且該抑制作用隨著時(shí)間和濃度逐漸增強(qiáng)。OSTP-DDP的作用強(qiáng)于DDP（P<0.05），提示OSTP-DDP具有對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞生長的靶向抑制作用。
　　3、通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示OSTP-DDP和DDP均可抑制腫瘤生長，但兩者的差異無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　4、通過流式細(xì)胞術(shù)檢測表明：經(jīng)OSTP-DDP和DDP作用后，A27

5、80細(xì)胞的生長周期均被阻滯于G1期，作用72h后，OSTP-DDP組細(xì)胞周期被阻滯在G1期為77.41±1.36，DDP組細(xì)胞周期被阻滯在G1期為71.11±0.86，說明OSTP-DDP對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞的周期阻滯作用強(qiáng)于DDP，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。作用24h、48h、72h后，OSTP-DDP組的凋亡率分別為：7.51％、44.46%、52.73%，DDP組的凋亡率分別為：4.44%、13.66%、15.67%。

6、OSTP-DDP對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用強(qiáng)于DDP組（P<0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示OSTP-DDP具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的靶向作用。
　　5、通過高效液相色譜分析，結(jié)果顯示：OSTP-DDP液體樣品中殘留的DDP含量分別為12.7696%（20μmolL-1）、0.8162％（40μmolL-1）、0.5406％（80μmolL-1）、0.0800％(160μmolL-1)、0.0700％（320μmolL-1

7、）。DDP液體樣品中殘留的DDP含量分別為17.1123%（20μmolL-1）、1.2643％（40μmolL-1）1.1500％（80μmolL-1）、1.1191％(160μmolL-1)、0.1091％（320μmolL-1）。顯示OSTP-DDP組中DDP進(jìn)入細(xì)胞的量要多于DDP組進(jìn)入細(xì)胞的量。
　　6、卵巢癌裸鼠移植瘤模型構(gòu)建成功，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明3mg2kg-1OSTP-DDP與DDP均對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞移植瘤具有一