Bevacizumab靶向治療卵巢癌及其對SKOV3細胞VEGF自分泌通路的抑制.pdf

1、1.目的：
　　1）VEGF及其受體VEGFR1（Flt-1）、VEGFR2（KDR）在上皮性卵巢癌組織中的表達與臨床預后的關系；
　　2）SKOV3細胞VEGF自分泌現(xiàn)象及Bevacizumab對其增殖的抑制作用研究。
　　2.方法：
　　1）VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中的表達及與臨床預后研究：
　?。?）正常卵巢、良性上皮性卵巢腫瘤及上皮性卵巢癌組織中VEGF、VEGF

2、R1及VEGFR2的表達差異；
　?。?）上皮性卵巢癌組織中VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表達與臨床病理參數(shù)之間的關系；
　?。?）VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者陽性表達之間的相關性；
　　（4）VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者共高表達與非共高表達5年生存率比較。
　　2）上皮性卵巢癌細胞中VEGF自分泌機制研究：
　?。?）對比及篩選上皮性卵巢癌細胞系中VEGF、VEGFR1（F

3、lt-1）、VEGFR2（KDR）的表達差異；
　?。?）檢測不同培養(yǎng)時間培養(yǎng)基血清中VEGF含量；
　?。?）外源加入不同濃度rhVEGF檢測篩選后細胞系增殖情況；
　?。?）驗證細胞自分泌途徑主要結合VEGFR2（KDR）分泌機制。
　　3）Bevacizumab（Bev）對上皮性卵巢癌細胞增殖影響及機制研究：
　?。?)鏡下觀察各種Bev濃度梯度下作用SKOV3細胞24h后細胞輪廓改變情況；
　

4、?。?)MTT法檢測不同濃度Bev及對照組細胞的增殖情況；
　?。?) Annexin-FITC/PI雙染色流式細胞儀檢測細胞凋亡；
　?。?)WB分析不同濃度Bev作用SKOV3后Flt-1、KDR及p-KDR表達變化；
　?。?）通過Ki8751選擇性抑制KDR受體，初步推斷其下游ERK可能參與Bev直接抑制SKOV3細胞自分泌通路。
　　3.結果：
　　1)VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2在

5、上皮性卵巢癌組織中的染色強度明顯高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢上皮；并且VEGF及其受體在上皮性卵巢癌組織中的表達與臨床分期及腹水量差異具有統(tǒng)計學意義；在相關分析中高表達的 VEGF與VEGFR2（r=0.316,p<0.05）、VEGFR1與VEGFR2（r=0.415,p<0.05）均存在相關性；VEGF及其受體的三者共高表達較非共高表達患者的5年生存率差異具有統(tǒng)計學意義（p=0.044）。
　　2）人卵巢癌細胞株SKOV3中存在

6、VEGF及其受體Flt-1、KDR的共表達及相對高表達（p<0.05），不同濃度的 rhVEGF對卵巢癌細胞株 SKOV3有促進增殖作用，且隨著濃度梯度的遞增，增殖成正比，初步推斷該過程可能由 KDR介導（t=7.64;t=5.53; t=4.22; t=6.59,p<0.05;），而非Flt-1介導（t=2.05; t=2.34; t=1.32，p>0.05），同時外源性rhVEGF可刺激SKOV3細胞VEGFR2（KDR）（t=5.

7、81，*P<0.05）及p-VEGFR2(p-KDR)（t=12.43，*P<0.05）的表達增高，提示卵巢癌細胞株 VEGF的自分泌機制主要通過KDR介導，而非Flt-1，并通過磷酸化受體p-KDR激活下游信號轉導途徑發(fā)揮作用。
　　3）不同濃度 Bevacizumab對卵巢癌細胞株 SKOV3有抑制增殖、增加凋亡作用（*P<0.05）； WB結果提示Bev以上的作用可能與阻斷VEGF自分泌環(huán)路有關，即降低相應受體 VEGFR2

8、（KDR）/p-VEGFR2(p-KDR)的表達(*P<0.05)，而非VEGFR1（Flt-1）（P>0.05）。此外，erk及p-erk分子在Bev、Ki8751（VEGFR2抑制劑）及 Bev+Ki8751組中的表達明顯較空白對照組顯著減少（*P<0.05），提示Bevacizumab可能通過間接抑制VEGFR2下游信號通路中erk及p-erk的表達而抑制細胞VEGF自分泌功能，進一步抑制卵巢癌細胞的增殖。
　　4.結論：<

9、br>　　1）VEGF及VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中顯著高表達，且高表達VEGF的卵巢癌更易發(fā)生淋巴轉移，VEGF及VEGFR1和VEGFR2與腫瘤分期、腹水產生有著密切關系。預后分析中共高表達VEGF及其受體VEGFR1和VEGFR2的患者預后較差，VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2三者共高表達不僅可作為卵巢癌患者預后的參考指標，也可成為抗腫瘤血管生成靶向治療療效的預測指標，即貝伐珠單抗應用于三者共高表達的患

10、者較三者不表達或低表達的患者可能具有更佳的治療效果。
　　2）人卵巢癌細胞株SKOV3中存在VEGF自分泌機制，rhVEGF對SKOV3有促增殖作用，也使腫瘤細胞表面受體 KDR及 p-KDR表達增高。VEGF可激活胞內p-KDR，進一步活化自分泌環(huán)路的下游信號。
　　3）Bevacizumab通過阻斷SKOV3細胞VEGF自分泌環(huán)路而降低表面受體KDR及p-KDR的表達，同時Bevacizumab可能通過間接抑制KDR下游