阿司匹林對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞SOX7表達(dá)和Wnt-β-catenin信號(hào)通路的影響.pdf

1、背景與目的：
　　卵巢癌是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)腫瘤性疾病之一，其發(fā)病率僅次于鱗狀細(xì)胞宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌而位居第三位，但其死亡率極高，接近65％，位居各類(lèi)婦科腫瘤的首位，其中約半數(shù)以上患者因該病復(fù)發(fā)或在治療過(guò)程中死亡。上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤疾病中發(fā)病率最高的病理類(lèi)型，約占總發(fā)病例數(shù)的85%~90%，并且患者極易發(fā)生死亡，盡管70%以上的患者均接受了外科手術(shù)治療和標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)治療，5年生存率依然很低。這些可能與卵巢癌的高度易轉(zhuǎn)

2、移性、某些細(xì)胞存在化學(xué)治療抵抗性以及卵巢復(fù)雜的胚胎發(fā)育、組織解剖和內(nèi)分泌功能有關(guān)。因此，深入研究卵巢癌的病因及發(fā)病分子機(jī)制對(duì)于臨床卵巢腫瘤疾病的診斷、防治和預(yù)后工作具有深遠(yuǎn)的意義。
　　阿司匹林是一種臨床上使用非常廣泛的非甾體抗炎藥，常用于骨關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、各種發(fā)熱和疼痛、動(dòng)靜脈血栓形成、凝血功能異常等疾病的治療。到現(xiàn)在為止，阿司匹林抗腫瘤作用的具體分子機(jī)制仍然未清晰。此外，阿司匹林對(duì)多種人類(lèi)腫瘤疾病的預(yù)防和治療均有著積極

3、的輔助意義，其在抗腫瘤研究中的巨大潛力應(yīng)引起廣泛的重視。
　　SOX7基因定位于人類(lèi)染色體8p23.1,包括兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子，具有HMG-box區(qū)域氨基酸序列高度保守性的特點(diǎn)，編碼由377個(gè)氨基酸構(gòu)成的小分子蛋白，參與調(diào)控早期的胚胎發(fā)育和內(nèi)胚層分化等重要生物過(guò)程。染色體8p等位基因缺失是人類(lèi)腫瘤疾病中最常見(jiàn)的細(xì)胞基因改變之一，缺失引起的抑癌基因失活是導(dǎo)致癌變發(fā)生的重要誘因。而SOX7基因恰恰位于這一區(qū)域，因此推測(cè)SOX7基因

4、可能作為一種抑癌基因參與了腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展。Wnt/β-catenin信號(hào)通路是Wnt基因參與調(diào)控的重要信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中最常見(jiàn)的一種信號(hào)通路，在進(jìn)化上具有高度的保守性，其機(jī)制研究相對(duì)較清楚，在多種人類(lèi)疾病特別是腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要調(diào)控作用，并且Wnt/β-catenin通路中某些基因的沉默、突變或是缺少均可以引起該信號(hào)通路的異?；罨瑥亩鹉[瘤的疾病的發(fā)生。SOX7基因可能通過(guò)對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用發(fā)

5、揮其在腫瘤細(xì)胞增殖、發(fā)育和凋亡等生理進(jìn)程中的關(guān)鍵性作用，但其具體分子調(diào)節(jié)機(jī)制仍仍有待研究；且SOX7基因和Wnt/β-catenin信號(hào)通路基因在上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況和分子作用機(jī)制以及兩者之間的相互影響在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中罕見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SOX7基因、Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游靶基因β-catenin和cyclinD1分別在卵巢癌組織和正常卵巢組織中的表達(dá)情況，以及使用不同濃度阿司匹林

6、刺激人上皮性卵巢癌 SKOV3細(xì)胞后基因SOX7、β-catenin和cyclinD1分別在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平的變化，同時(shí)利用MTT法檢測(cè)不同濃度阿司匹林刺激對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖活性的影響。旨在探索SOX7基因與Wnt/β-catenin信號(hào)通路在上皮性卵巢癌發(fā)生中的作用及具體分子機(jī)制。
　　方法：
　?。?）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SOX7、Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游靶基因β-catenin

7、和cyclinD1分別在卵巢癌組織和正常卵巢組織中表達(dá)水平的差異。
　?。?）使用不同濃度阿司匹林（0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L）作用于人上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)基因SOX7、β-catenin和cyclinD1分別在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平的變化。
　?。?）采用MTT法檢測(cè)不同濃度阿司匹林刺激對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖活性的影響，并

8、計(jì)算腫瘤細(xì)胞的抑制率。
　　采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示，符合正態(tài)分布的兩組數(shù)據(jù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，正態(tài)分布的多組數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，多個(gè)樣本均數(shù)之間的兩兩比較使用LSD-t檢驗(yàn)，兩組數(shù)據(jù)變量的關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson相關(guān)。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.SOX7、β-catenin和cyc

9、linD1在上皮性卵巢癌患者腫瘤組織和正常卵巢組織中的含量:
　　SOX7、β-catenin和cyclinD1在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌患者腫瘤組織中的表達(dá)情況分別是：SOX7，6.102±0.781 vs1.701±1.104, t=3.614, P=0.001；β-catenin，2.312±0.267 vs9.214±0.351, t=13.651, P<0.001；cyclinD1，3.021±0.981 vs6.70

10、1±1.216, t=5.967, P<0.001。
　　2.阿司匹林刺激后人上皮性卵巢癌 SKOV3細(xì)胞內(nèi)基因 SOX7、CyclinD1和β-catenin的表達(dá)水平變化：
　　使用不同濃度的小劑量阿司匹林刺激SKOV3細(xì)胞，基因SOX7的表達(dá)水平隨刺激濃度增加而依次升高（分別為0.725±0.101 vs0.947±0.011 vs1.923±0.126 vs2.857±0.218 vs4.402±0.086，F(xiàn)=12

11、.151，P<0.001），而基因β-catenin和cyclinD1的表達(dá)水平隨刺激濃度增加而依次降低（分別為β-catenin：1.759±0.334 vs1.644±0.645 vs0.963±0.553 vs0.705±0.618 vs0.643±0.539，F(xiàn)=6.214， P<0.001；cyclinD1：2.313±0.142 vs2.144±0.055 vs1.542±0.033 vs0.941±0.018 vs0.32

12、3±0.012，F(xiàn)=4.903，P<0.001)。
　　3.阿司匹林刺激后SOX7、CyclinD1和β-catenin表達(dá)水平的相關(guān)性分析
　　阿司匹林刺激后，SOX7 mRNA表達(dá)量與CyclinD1 mRNA表達(dá)量具有顯著的相關(guān)性（r=-0.978，P<0.05）；SOX7 mRNA表達(dá)量與β-catenin mRNA表達(dá)量具有顯著的相關(guān)性（r=-0.983，P<0.05）；CyclinD1 mRNA表達(dá)量與β-cat

13、enin mRNA表達(dá)量具有顯著的相關(guān)性（r=0.986，P<0.05）。
　　4.MTT法檢測(cè)不同濃度阿司匹林對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖活性的影響：
　　小劑量阿司匹林對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖活性具有明顯的抑制作用（分別為0vs0.935±0.065 vs11.784±2.743 vs20.192±3.441 vs32.462±5.821，F(xiàn)=20.481，P=0.000），并且隨著濃度的升高，阿司匹林

14、對(duì)細(xì)胞增殖活性的抑制作用越明顯，對(duì)細(xì)胞的抑制率越大，細(xì)胞凋亡的越多，具有濃度依賴性趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1．SOX7基因可能作為一種抑癌基因參與EOC的發(fā)病機(jī)制，且EOC內(nèi)存在Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異?；罨?，。
　　2．阿司匹林可顯著上調(diào)人上皮性卵巢癌 SKOV3細(xì)胞中SOX7，下調(diào)CyclinD1和β-catenin，并抑制SKOV3細(xì)胞的增殖活性，促進(jìn)凋亡發(fā)生，有機(jī)會(huì)作為一種新的抗腫瘤藥物用于臨床腫