LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對人卵巢癌A2780-DDP細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、第一部分:LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體的鑒定及其靶向性體外評價(jià)
　　 目的:鑒定生物素-鏈酶親和素橋接法制備LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體的可行性，并對其靶向性進(jìn)行體外評價(jià)。
　　 方法:采用免疫膠體金方法檢測靶向鴉膽子油脂質(zhì)體表面LHRHa靶分子;以香豆素6為熒光探針，制備載香豆素6的LHRHa靶向脂質(zhì)體（LHRHa-C6-Lipo），設(shè)非靶向香豆素6脂質(zhì)體（C6-Lipo）為陰性對照組，激光共聚焦顯微鏡觀察LHRH受體

2、表達(dá)陽性的A2780/DDP細(xì)胞及LHRH受體表達(dá)陰性的SKOV3細(xì)胞對兩種脂質(zhì)體的攝取情況;應(yīng)用流式細(xì)胞儀定量檢測A2780/DDP細(xì)胞和SKOV3細(xì)胞對LHRHa-C6-Lipo、LHRHa-C6-Lipo+游離LHRHa、C6-Lipo相互作用后細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。
　　 結(jié)果:制備的LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組免疫膠體金染色試驗(yàn)陽性，對照組則為陰性;激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示A2780/DDP細(xì)胞對LHRHa-C6-Lipo

3、的攝取明顯高于其對C6-Lipo的攝取，但SKOV3細(xì)胞對LHRHa-C6-Lipo及C6-Lipo的攝取無明顯差異;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示A2780/DDP對LHRHa-C6-Lipo的攝取明顯高于其對其他兩組脂質(zhì)體的攝取(P＜0.05)，而SKOV3細(xì)胞對三組脂質(zhì)體的攝取沒有明顯差異(P＞0.05)，且同時(shí)發(fā)現(xiàn)A2780/DDP細(xì)胞對LHRHa-C6-Lipo、LHRHa-C6-Lipo+游離LHRHa的攝取明顯大于SKOV3細(xì)胞(

4、P＜0.05)，但A2780/DDP細(xì)胞和SKOV3細(xì)胞對C6-Lipo的攝取沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功制備了LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體，該靶向脂質(zhì)體能與體外培養(yǎng)的A2780/DDP細(xì)胞通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用特異性地結(jié)合。
　　 第二部分:LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對人卵巢癌A2780/DDP細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制研究
　　 目的:研究LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對人卵巢癌A

5、2780/DDP細(xì)胞株增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)的作用及其機(jī)制。
　　 方法:體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株A2780/DDP，制備LHRHa靶向空白脂質(zhì)體組，采用MTT比色法檢測一系列濃度LHRHa靶向空白脂質(zhì)體對A2780/DDP細(xì)胞的毒性作用。根據(jù)處理因素不同，將對數(shù)期生長A2780/DDP細(xì)胞隨機(jī)分為4組:1.對照組、2.鴉膽子油乳組、3.鴉膽子油脂質(zhì)體組、4.LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組。采用MTT比色法檢測各組細(xì)胞的增殖抑制率，H

6、oechst33258染色觀察各組細(xì)胞核形態(tài)變化，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，JC-1染色法檢測各組細(xì)胞線粒體膜電位的變化，Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白bax/bcl-2、caspase-3、caspase-8的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:LHRHa靶向空白脂質(zhì)體濃度從0.5mg/ml增大到8mg/ml，作用時(shí)間從24h延長到48h，A2780/DDP細(xì)胞的存活率均大于90％;鴉膽子油乳、鴉膽子油脂質(zhì)體、LHRHa靶向鴉

7、膽子油脂質(zhì)體均可抑制A2780/DDP細(xì)胞增殖，且隨著作用時(shí)間的延長，抑制作用逐漸增強(qiáng)，其中LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組的增殖抑制作用最為顯著，24h、48h和72h分別為(37.66±1.73)％、(51.26±3.46)％和(65.45±4.42)％，明顯高于同一時(shí)間點(diǎn)其他各處理組(P＜0.05); Hoechst33258染色顯示空白對照組細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則，其余三組分別出現(xiàn)不同程度細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組細(xì)胞核

8、形態(tài)改變程度最嚴(yán)重，流式細(xì)胞術(shù)檢測該組凋亡率為(32.62±0.79)％，明顯高于其他各處理組(P＜0.05);JC-1染色顯示LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組A2780/DDP細(xì)胞線粒體膜電位下降比例最大，為（38.16±5.08）％，與其他各組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體能明顯增強(qiáng)A2780/DDP細(xì)胞bax蛋白、caspase-3蛋白和caspase-8蛋白的表達(dá)，降低bcl-2蛋白的表達(dá)，與