MG132、DDP聯(lián)合用藥對(duì)卵巢癌細(xì)胞Caov-3增殖、凋亡的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究蛋白酶抑制劑MG132與DDP聯(lián)合用藥對(duì)卵巢癌細(xì)胞株Caov-3增殖和凋亡的影響，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB、caspase-3以及VEGF的表達(dá)情況，了解MG132的體外抗卵巢癌作用及其可能的作用機(jī)制，為蛋白酶抑制劑在卵巢癌治療方面提供重要的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： 1、采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法，檢測(cè)24h、36h、48h Caov-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。陰性對(duì)照組：加1640培養(yǎng)基；MG132組：終

2、濃度為1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM；DDP組：終濃度為1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μ9/ml；聯(lián)合用藥組：5μM的MG132預(yù)處理2h，DDP終濃度同DDP單獨(dú)用藥組。 2、采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)24h Caov-3細(xì)胞的凋亡率。 陰性對(duì)照組：加1640培養(yǎng)基；DDP組：終濃度為2.5μg/ml；聯(lián)合用藥組：DDP終濃度為2.5μg/ml，MG132預(yù)處理2h的濃度分別為2

3、.5μM、5μM、10μM。 3、免疫組化SP法測(cè)定藥物作用24h后Caov-3細(xì)胞中NF-κB、caspase-3以及VEGF的表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)分組與流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡分組相同。 結(jié)果： 1.MG132濃度為1.25μM、2.5μM、5μM、10μM和20μM時(shí)，作用24h、36h、48h均明顯抑制Caov-3細(xì)胞的增殖，并具有時(shí)間-劑量依賴性。同一時(shí)間內(nèi)，隨著MG132濃度升高，Caov-3的CGIR增高，不

4、同濃度組間的CGIR差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。濃度相同時(shí)，隨著MG132作用時(shí)間的延長(zhǎng)，Caov-3的CGIR增高，不同時(shí)間組間的CGIR差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。24h、36h、48h，Caov-3的IC50分別為：5.87μM、3.75μM、2.41μM。 2.DDP聯(lián)合應(yīng)用MG132時(shí)能顯著提高DDP對(duì)Caov-3細(xì)胞的殺傷能力。單用DDP1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml和10μg/ml分

5、別作用24h、36h、48h時(shí)的IC50為6.21μg/ml、3.41μg/ml、2.24μg/ml。用5μM的MG132預(yù)處理2h后，DDP的IC50改變?yōu)?.35μg/ml、2.14μg/ml、1.45μg/ml。聯(lián)合應(yīng)用MG132、DDP與單獨(dú)使用DDP對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率相比，差異有顯著性(P<0.01)。 3.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Caov-3細(xì)胞的凋亡率，2.5μg/ml的DDP作用24h小時(shí)后，細(xì)胞凋亡率為10.7

6、8％，用MG132預(yù)處理2h再聯(lián)合DDP用藥后細(xì)胞凋亡增加更明顯，細(xì)胞凋亡率在預(yù)處理MG132濃度為2.5μM、5μM、10μM時(shí)分別為17.21％、28.08％、43.50％，顯著高于陰性對(duì)照組、DDP組，聯(lián)合用藥組各組間兩兩比較差異有顯著性(P<0.01)。 4.免疫組化SP法顯示MG132、DDP聯(lián)合用藥作用24h小時(shí)后Caov-3細(xì)胞中NF-κB、VEGF的表達(dá)下調(diào)，caspase-3表達(dá)增加。與對(duì)照組、DDP組比較差異

7、有顯著性(P<0.01)，聯(lián)合用藥組各組間兩兩比較差異有顯著性(P<0.01)。 結(jié)論： 1.MG132能有效抑制卵巢癌細(xì)胞Caov-3增殖。 2.MG132能誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞Caov-3凋亡，其部分作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制NF-κB的活化并促進(jìn)caspase-3的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 3.MG132能下調(diào)VEGF的表達(dá)，可能與抑制NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)。 4.MG132能夠增強(qiáng)