MPA、MG132對(duì)不同PR表達(dá)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討醋酸甲羥孕酮（medroxyprogesterone acetate, MPA）、蛋白酶體抑制劑(Z-LLL-CHO, MG132)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)不同PR表達(dá)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制，為卵巢癌的臨床治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴不同濃度的MPA（0、1、20、50、100μmol/L）、MG132（0、1、2.5、5、10μmol/L）單獨(dú)干預(yù)24-72 h，分別于24 h、48 h、72 h采用CC

2、K8法檢測(cè)兩種細(xì)胞的增殖情況。⑵取呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的兩種細(xì)胞分為：空白對(duì)照組（0μmol/L）、MG132組(5μmol/L)、MPA組（100μmol/L）、MG132+MPA組（5+100μmol/L），均作用24 h：a、采用CCK8法檢測(cè)兩種細(xì)胞的增殖情況；b、倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并攝片；c、采用AnnexinV-FITC/PI雙染法通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物作用前后細(xì)胞的凋亡情況；d、利用免疫組化法（Immunohistoch

3、emistry, IHC）檢測(cè)藥物作用前后PR的表達(dá)情況；e、利用免疫印跡法（Westeron blot, WB）檢測(cè)藥物作用前后孕激素受體亞型PRA、PRB的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：①CCK8結(jié)果顯示：MPA組（不同濃度）的HO-8910細(xì)胞存活率（％）分別為：（作用24 h）100.00±5.47、101.65±5.24、86.52±0.89、77.38±0.94、63.05±3.60；（作用48 h）100.00±0.94、1

4、04.45±0.37、71.06±3.22、55.70±0.74、48.08±0.08；（作用72 h）100.00±0.38、105.52±2.15、58.63±0.21、43.30±0.57、29.43±0.39。MPA組（不同濃度）的SKOV3細(xì)胞存活率（%）分別為：（作用24 h）100.00±3.46、101.53±3.3、95.39±2.02、89.15±2.51、84.49±2.29；（作用48 h）100.00±2.70

5、、99.58±0.29、89.22±1.67、86.37±0.22、78.44±5.08；（作用72 h）100.00±3.59、103.22±6.12、87.21±3.32、78.68±3.30、65.56±0.79。20-100μmol/L的MPA對(duì)HO-8910細(xì)胞的增殖抑制作用明顯強(qiáng)于SKOV3細(xì)胞且細(xì)胞存活率均呈劑量-效應(yīng)和處理時(shí)間-效應(yīng)依賴性下降。MG132組（不同濃度）的HO-8910細(xì)胞的存活率（%）分別為：（作用24

6、h）100.00±1.30、98.73±1.09、83.29±0.43、71.36±3.10、66.54±8.33；（作用48 h）100±0.06、89.35±2.05、73.39±1.86、59.46±0.69、47.40±0.98；（作用72 h）100±2.70、79.67±2.80、54.72±3.56、48.42±0.20、34.90±0.25。MG132組（不同濃度）的SKOV3細(xì)胞的存活率（%）分別為：（作用24 h）1

7、00.00±4.58、94.39±4.33、86.12±3.18、75.73±2.57、61.41±1.11；（作用48 h）100.00±3.40、80.18±2.73、62.11±3.89、51.76±3.99、46.97±1.75；（作用72 h）100.00±0.35、62.86±8.79、62.86±8.79、43.39±2.10、37.36±0.36、29.18±1.62。1-10μmol/L的MG132對(duì)HO-8910細(xì)胞

8、和SKOV3細(xì)胞的增殖抑制作用相似且細(xì)胞存活率均呈劑量-效應(yīng)和處理時(shí)間-效應(yīng)依賴性下降。HO-8910細(xì)胞中，MG132和MPA聯(lián)合用藥組的細(xì)胞存活率（62.43%±3.56%）與單用MPA組的細(xì)胞存活率（63.05%±3.60%）相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,但在SKOV3細(xì)胞中MG132和MPA聯(lián)合用藥組的細(xì)胞存活率（65.52%±1.52%）明顯低于單用MPA組的細(xì)胞存活率（84.49%±2.29%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p

9、＜0.05）。②細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：control組細(xì)胞呈典型的上皮樣細(xì)胞特征，以類橢圓形及長(zhǎng)梭形為主，鋪路石樣生長(zhǎng)，細(xì)胞排列規(guī)則緊湊；MG132組細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞間隙增大，視野內(nèi)見較多漂浮細(xì)胞，部分細(xì)胞體積變大，偽足細(xì)長(zhǎng)，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡；MG132+MPA組細(xì)胞數(shù)目減少更明顯，視野內(nèi)見大量漂浮細(xì)胞，胞漿內(nèi)的空泡更多；兩者M(jìn)PA組細(xì)胞形態(tài)存在明顯差異，HO-8910細(xì)胞MPA組細(xì)胞改變與MG132組細(xì)胞改變相似，而SKOV3細(xì)胞MPA組細(xì)

10、胞數(shù)量稍減少，細(xì)胞排列較緊湊，部分細(xì)胞伸出偽足，呈多角形，未見明顯漂浮細(xì)胞及胞漿內(nèi)空泡。③流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：HO-8910細(xì)胞中各組細(xì)胞凋亡率（%）：control組0.42±0.04、MG132組7.49±0.83、MPA組11.95±0.52、MG132+MPA組12.54±0.42；SKOV3細(xì)胞中各組細(xì)胞凋亡率（%）：control組0.64±0.06、MG132組7.29±0.41、MPA組6.37±0.54、MG132+M

11、PA組14.67±0.65；聯(lián)合用藥時(shí)， SKOV3細(xì)胞中， MG132+MPA組細(xì)胞凋亡率明顯大于單用MPA組（p＜0.05），但在HO-8910細(xì)胞中， MG132+MPA組凋亡率與單用MPA組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。④免疫組化法結(jié)果顯示：PR于胞核表達(dá)豐富，胞漿也可見表達(dá)，HO-8910細(xì)胞中PR高表達(dá)，SKOV3細(xì)胞中PR低表達(dá)。兩種細(xì)胞中MG132組、MG132+MPA組PR表達(dá)均高于control組（p＜0.

12、05），而MPA組PR表達(dá)與control組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。⑤免疫印跡法結(jié)果顯示：HO-8910、SKOV3細(xì)胞中PRB的表達(dá)明顯高于PRA。MG132組、MG132+MPA組PRB、PRA的表達(dá)均高于control組（p＜0.05），而MPA組PRA、PRB的表達(dá)與control組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。
　　結(jié)論：⑴MPA對(duì)PR高表達(dá)細(xì)胞株HO-8910的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用明顯強(qiáng)于P