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文檔簡介
1、目的:研究MG132對HepG2細胞UPP和MDR基因表達的影響,探討MG132誘導肝癌細胞HepG2凋亡的機制?! 》椒ǎ翰捎昧魇郊毎g、Hoechst33258染色、吖啶橙(AO)染色檢測HepG2細胞凋亡;采用RT-PCR方法檢測UPP相關基因E1、E2、E3、26Sproteasome、p53、Caspase3及MDRmRNA的表達;采用免疫細胞化學方法觀察p53、Caspase3及P-gp蛋白表達的變化;采用Western-
2、Blot檢測P-gp蛋白的表達;采用高效液相色譜分析法檢測細胞內(nèi)表阿霉素(EPI)的濃度?! 〗Y果:經(jīng)流式細胞術檢測,蛋白酶體抑制劑MG132(2μmol/L,5μmol/L)處理24h后HepG2細胞凋亡率增加。細胞熒光染色出現(xiàn)核濃縮、碎裂等凋亡特征。MG132處理后HepG2細胞UPP的相關基因E1、E2、E3、26SproteasomemRNA表達下降,p53、Caspase3mRNA水平和蛋白水平增高。1μmol/LMG132
3、與1μg/ml表阿霉素聯(lián)合應用可增強對HepG2細胞的殺傷作用,二者合用可達到單用2μg/ml表阿霉素的致凋亡效應;MG132能夠下調(diào)表阿霉素處理后HepG2細胞MDRmRNA轉錄水平及P-gp蛋白的表達。與單用表阿霉素組相比,聯(lián)合應用小劑量的表阿霉素和MG132處理組細胞內(nèi)表阿霉素含量增高?! 〗Y論:1.蛋白酶體抑制劑MG132能夠誘導HepG2細胞凋亡;2.蛋白酶體抑制劑MG132誘導HepG2細胞凋亡的機制可能與MG132下調(diào)U
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