蛋白酶體抑制劑MG132促HepG2細(xì)胞凋亡及其對(duì)MDR基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究MG132對(duì)HepG2細(xì)胞UPP和MDR基因表達(dá)的影響，探討MG132誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的機(jī)制?！　》椒ǎ翰捎昧魇郊?xì)胞術(shù)、Hoechst33258染色、吖啶橙(AO)染色檢測(cè)HepG2細(xì)胞凋亡；采用RT-PCR方法檢測(cè)UPP相關(guān)基因E1、E2、E3、26Sproteasome、p53、Caspase3及MDRmRNA的表達(dá)；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀(guān)察p53、Caspase3及P-gp蛋白表達(dá)的變化；采用Western-

2、Blot檢測(cè)P-gp蛋白的表達(dá)；采用高效液相色譜分析法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)表阿霉素(EPI)的濃度?！　〗Y(jié)果：經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，蛋白酶體抑制劑MG132(2μmol/L，5μmol/L)處理24h后HepG2細(xì)胞凋亡率增加。細(xì)胞熒光染色出現(xiàn)核濃縮、碎裂等凋亡特征。MG132處理后HepG2細(xì)胞UPP的相關(guān)基因E1、E2、E3、26SproteasomemRNA表達(dá)下降，p53、Caspase3mRNA水平和蛋白水平增高。1μmol/LMG132

3、與1μg/ml表阿霉素聯(lián)合應(yīng)用可增強(qiáng)對(duì)HepG2細(xì)胞的殺傷作用，二者合用可達(dá)到單用2μg/ml表阿霉素的致凋亡效應(yīng)；MG132能夠下調(diào)表阿霉素處理后HepG2細(xì)胞MDRmRNA轉(zhuǎn)錄水平及P-gp蛋白的表達(dá)。與單用表阿霉素組相比，聯(lián)合應(yīng)用小劑量的表阿霉素和MG132處理組細(xì)胞內(nèi)表阿霉素含量增高?！　〗Y(jié)論：1.蛋白酶體抑制劑MG132能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡；2.蛋白酶體抑制劑MG132誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與MG132下調(diào)U