泛素-蛋白酶體抑制劑MG132對TGF-β1誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞活化的影響及分子機制研究.pdf

1、研究背景：肺纖維化是已知或未知病因的具有相似病理過程的一組彌漫性肺疾病的共同病理改變。其病理特征主要表現(xiàn)為肺間質(zhì)/肺泡炎性細(xì)胞的浸潤，成纖維細(xì)胞的過度增殖、活化，細(xì)胞外基質(zhì)成分的大量合成、沉積等而致使正常肺組織的結(jié)構(gòu)改變及功能喪失。大量研究已表明，轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factorβ1，TGF-β1)在這一病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。TGF-β1通過細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用，而 Smad是其目的基

2、因轉(zhuǎn)錄的主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。這一信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到嚴(yán)格而精確的調(diào)控，從而保證在正常的生理條件下信號輸出的穩(wěn)定性。
　　泛素-蛋白酶體通路（Ubiquitin Proteasome Pathway，UPP）作為真核細(xì)胞中選擇性調(diào)節(jié)內(nèi)源性蛋白質(zhì)降解與功能的重要系統(tǒng)，它廣泛參與了細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗原提呈等多種生理過程，因而對維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)有著十分重要的意義。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，泛素-蛋白酶體通路功能的改變或異?？芍苯訉?dǎo)致或誘發(fā)人類

3、許多重要疾病。
　　近年來研究表明，泛素-蛋白酶體抑制劑能夠減輕或抑制實驗性肝、腎、心臟、骨髓、皮膚和肺纖維化，但其具體的分子機制尚不十分清楚。MG132是一種醛基肽類泛素-蛋白酶體抑制劑，能夠抑制細(xì)胞中不同類型蛋白酶的活性，從而阻斷靶蛋白的泛素化降解，目前在實驗研究中得到廣泛應(yīng)用。
　　目的：探討泛素-蛋白酶體抑制劑MG132對TGF-β1誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞活化的影響及可能的分子機制
　　方法：（1）體外培養(yǎng)人肺成纖

4、維細(xì)胞MRC-5。（2）MTS法檢測TGF-β1對人肺成纖維細(xì)胞MRC-5增殖活性的影響。（3）以人肺成纖維細(xì)胞MRC-5為研究對象，隨機分為3組：對照組（未加入TGF-β1或MG132）；TGF-β1組(10 ng/mL)；MG132組[TGF-β1(10 ng/mL)+ MG132(0.5μmol/L)]。（4）Western blot方法檢測各組細(xì)胞中α-SMA和I型膠原α1（collagen type I alpha1，COL1

5、A1)的表達(dá)情況。（5）RT-PCR和Western blot方法分別檢測各組細(xì)胞中TGF-βI型受體（TβRI）、Smad2、Smad3、Smad7及核轉(zhuǎn)錄共抑制因子SnoN的mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）TGF-β1對人肺成纖維細(xì)胞MRC-5的增殖具有明顯促進作用，且10ng/ml為最佳作用濃度；同時TGF-β1對人肺成纖維細(xì)胞MRC-5表現(xiàn)出明顯的抗增殖抑制作用。（2）與對照組比較，TGF-β1組中α-SMA和C

6、OL1A1蛋白表達(dá)水平明顯增加（P<0.05）；與單純TGF-β1刺激組比較，MG132組上述2種蛋白表達(dá)水平均有所下降（P<0.05）。（3）與對照組比較，TGF-β1組和MG132組Smad7和SnoN mRNA的表達(dá)水平均有所增加（P<0.05），而MG132組與單純TGF-β1刺激組比較表達(dá)水平相仿（P>0.05）。與mRNA表達(dá)水平相反，TGF-β1組 Smad7和SnoN蛋白表達(dá)水平與對照組比較均有所減少（P<0.05）；與

7、單純TGF-β1刺激組比較，MG132組Smad7和SnoN蛋白表達(dá)水平均有所增加（P<0.05）。（4）TGF-β1組和MG132組TβRI mRNA和蛋白表達(dá)水平與對照組相比均有所增加（P<0.05），而 MG132組與單純 TGF-β1刺激組比較其表達(dá)水平相仿（P>0.05）。（5）三組細(xì)胞Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表達(dá)水平相仿（P>0.05）。
　　結(jié)論：（1）TGF-β1對人肺成纖維細(xì)胞具有促進增殖及抗增殖抑