蛋白酶體抑制劑MG-132作用下失神經(jīng)骨骼肌myf-5的表達.pdf

1、目的：探討去神經(jīng)骨骼肌使用蛋白酶體抑制劑MG-132后骨骼肌成肌調(diào)節(jié)因子Myf-5的表達情況。
　　 方法：取SD大鼠54只,隨機分成3組,即A組:空白對照組；B組:去神經(jīng)組；C組:去神經(jīng)MG-132干預組；每組18只。A組不切斷坐骨神經(jīng),僅作假手術(shù)；B組和C組全部制作成標準的右側(cè)坐骨神經(jīng)離斷,腓腸肌失神經(jīng)支配模型,并在C組大鼠失神經(jīng)腓腸肌局部多點注射濃度為20μmol／L的蛋白酶體抑制劑MG-132100μL,1次／d。分別于

2、去神經(jīng)第2d、7d、28d,用脊椎脫臼法處死大鼠,解剖并分離出右小腿的腓腸肌,切取肌肉標本置于-80℃冰箱凍存,留待28d后統(tǒng)一檢測。用RT-PCR法檢測Myf-5的mRNA:以GAPDH作為內(nèi)參照,做半定量檢測。取樣本組織50mg勻漿后用抽提試劑進行總RNA抽提,然后用MBI的RT-PCR試劑盒,按樣本RNA2μg,20μl體系進行反轉(zhuǎn)錄。Myf-5的引物通過primer5.0引物設計軟件設計,其上游引物:5-TGCCATCCGCTA

3、CATTGAGAG-3’,下游引物:5’-CCGGGGTAGCAGGCTGTGAGTTG-3’,作為內(nèi)參照的GAPDH的引物由山西醫(yī)科大學實驗中心提供,其上游引物:5’-TCCCTCAAGATTGCTAGCAA-3’,下游引物:5’-AGATCCACAACGGATACATT-3’,共308bp。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應按50μl.體系,反應條件為:96℃,2’,1cycle。9℃,30’’；Tm(Myf-553℃)／(GAPDH50℃),30

4、"；72℃,236cycle。Western-blot檢測Myf-5蛋白表達的變化,并用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：去神經(jīng)組與去神經(jīng)MG-132干預組Myf-5的mRNA和蛋白質(zhì)在去神經(jīng)支配后第2d、7d、28d均表達上調(diào)與空白對照組比較都有統(tǒng)計學差異(P<0.01)；去神經(jīng)組與去神經(jīng)MG-132干預組Myf-5的mRNA和蛋白質(zhì)在去神經(jīng)支配后第2d、7d、28d的比較有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。