鐵螯合劑對蛋白酶體抑制劑所致黑質神經元變性的保護作用.pdf

1、[目的]1、研究泛素—蛋白酶體系統(tǒng)(Ubiquitin-proteasomesystem，UPS)在神經元變性中的作用，明確蛋白酶體抑制劑能否引起選擇性黑質神經元變性。 2、研究鐵與泛素—蛋白酶體系統(tǒng)的關系，以及鐵螯合劑對蛋白酶體抑制劑所致黑質神經元變性的影響。 [方法]1、動物實驗。四周齡C57BL/6小鼠隨機分為A、B、C、D四組，其中D組以缺鐵食物喂養(yǎng)，其余以普通食物喂養(yǎng)。至八周齡時所有小鼠接受單側立體定向微量注射

2、，注射位置均為右側Middleforebrainbundle(MFB)，注射物A組為磷酸鹽緩沖液(PBS)作為正常對照，B組為蛋白酶體抑制劑Lactacystin，C組為蛋白酶體抑制劑Lactacystin加鐵螯合劑Deferoxamine(DFO)，D組為蛋白酶體抑制劑Lactacystin。飼養(yǎng)至十二周齡時所有小鼠灌注取腦，迅速分離紋狀體凍存于—80℃冰箱，分離中腦后以多聚甲醛、蔗糖液分步固定、脫水后4℃保存。 2、免疫組化

3、分析。中腦組織塊經黑質區(qū)全段冠狀切片(30μm)，分別作酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)染色及泛素(Ubiquitin)免疫熒光染色。并按序列計數黑質區(qū)酪氨酸羥化酶染色陽性細胞作為多巴胺能神經元定量計算依據。 3、生物化學分析。右側紋狀體組織超聲勻化后作高效液相色譜分析(HPLC)，分別測定多巴胺(DA)及其代謝產物高香草酸(HVA)、3,4-dihydroxyphenylaceticacid(DOP

4、AC)、5-hydroxyindolaceticacid(5-HIAA)濃度，以及5羥色胺(5-HT)濃度。血清鐵以及腦鐵濃度以原子吸收分光光度法測定。 [結果]1、蛋白酶體抑制劑Lactacystin注射可引起多巴胺能神經元損傷。與正常對照組相比，注射Lactacystin組引起同側黑質區(qū)TH陽性細胞數減少51％，同側紋狀體多巴胺(DA)及其代謝產物DOPAC、HVA濃度分別減少52％、46％、51％，而5-HT及5-HIAA

5、濃度無差別。并且在約5.2％黑質細胞中可見泛素染色陽性的類包涵體樣物質形成，而這一現象并未見之于正常對照組。 2、鐵螯合劑對蛋白酶體抑制劑作用的影響。同時注射鐵螯合劑DFO和Lactacystin組比單獨注射Lactacystin組的右側黑質區(qū)TH陽性細胞計數多約35％，其同側紋狀體多巴胺(DA)及其代謝產物DOPAC、HVA濃度分別多約31％、41％、36％。同時可見泛素染色陽性類包涵體樣物質形成的黑質細胞數約3.1％，較之單

6、獨注射Lactacystin組的5.2％為少。 3、系統(tǒng)性缺鐵對蛋白酶體抑制劑作用的影響。缺鐵飼料導致血清鐵和腦鐵濃度分別降低40％、32％。缺鐵飼料加Lactacystin注射組減少右側黑質區(qū)TH陽性細胞數約47％，較之單獨注射Lactacystin組所致的52％減少略輕，但差別無顯著性意義。其同側紋狀體多巴胺(DA)及其代謝產物DOPAC、HVA濃度改變也沒有顯著差別。 [結論]1、泛素—蛋白酶體系統(tǒng)在神經元變性中起