蛋白酶體抑制劑-萬珂對體外混合淋巴細胞反應的干預研究.pdf

1、移植物抗宿主病(Graft-versus-Host disease簡稱GVHD)是造血干細胞移植死亡的重要原因，其發(fā)病機制主要涉及到三個方面：1．預處理組織損傷與細胞因子活化；2．供者T細胞活化；3．宿主靶器官損傷。近年來NF-κB在GVHD的發(fā)病中的作用受到重視，有研究發(fā)現(xiàn)NF-κB與樹突狀細胞抗原提呈有關<'1>，并且通過阻斷NF-κB與IL-12的基因組DNA結合下調IL-12的表達可以抑制免疫反應<'2>。GVHD的防治策略主要

2、有細胞因子的屏蔽、阻斷T細胞與抗原提呈細胞(APC)之間的相互作用及誘導免疫耐受三個方面。萬珂作為最早用于臨床的蛋白酶體抑制劑，有研究顯示其在免疫調節(jié)和防治GVHD方面可能存在一定的前景。 目的： 1．在體外HLA配型不相合、半相合、全相合混合淋巴細胞反應體系中觀察細胞增殖的差異及萬珂對細胞增殖的影響。 2．觀察體外單向混合淋巴細胞反應體系NF-κB mRNA表達量在萬珂干預前后的差異，探討其在GVHD發(fā)病中的作

3、用及萬珂可能的免疫調節(jié)機制。 3.通過檢測細胞上清液細胞因子的含量探討Th1、Th2細胞在GVHD發(fā)病中的作用。 方法： 1.選擇擬行骨髓移植的HLA全相合、半相合病人及其供者，另選擇兩位HLA不相合的無血緣關系的健康志愿者建立體外混合淋巴細胞反應體系。抽取外周血10ml/人，以供者T淋巴細胞作為反應細胞，受者單個核細胞作為刺激細胞(鈷60輻照25Gy)，MTT法測吸光度，計算細胞增殖率。萬珂分別于體系建立同時及

4、培養(yǎng)72小時后加入。 2.反應體系建立后5天按常規(guī)方法提取mRNA，RT-PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳半定量分析。 3.反應體系建立后5天收集細胞上清液，ELISA法檢測上清IL-4、IFN-γ含量。 結果： 1.在混合淋巴細胞培養(yǎng)中供者T細胞刺激后明顯增殖(p<0.05)，其中以完全不相合組增殖最明顯(p<0.05)。萬珂處理后增殖率明顯下降(p<0.05)，萬珂早期干預比晚期干預增值率下降更明顯(p<0

5、05)。 2.供者T細胞刺激后NF-κB mRNA量增加，以完全不相合組最明顯(p<0.05)。萬珂處理后NF-κB mRNA量減少，全相合組萬珂早期干預比晚期干預下降明顯(p<0.05)，不相合組和半相合組萬珂不同時間干預無明顯差異。 3.供者T細胞刺激后IL-4及IFN-γ含量均有增加(p<0.05)，但以IFN-γ，增加更為顯著。萬珂處理后兩者均減少(p<005)。 結論： 1. 萬珂對受同種異體抗