BAX基因致人卵巢癌細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、研究背景：
　　 卵巢癌嚴重威脅著廣大婦女的健康,起病隱匿,尚缺乏有效地預防和篩查手段,大多數患者就診時已屆晚期,盡管手術、放化療技術對該病的有效率已達70%,但大多數病人仍在短期內復發(fā),5年存活率不到30%?；蛑委熓窍蚰[瘤細胞引入抑癌基因或促進凋亡基因,以糾正或補償基因缺陷從而達到治療目的,并使治療基因在腫瘤細胞內暫時或永久表達,導致腫瘤細胞凋亡或壞死,從而達到殺傷或抑制腫瘤細胞生長的目的?；蛑委煹某绦虬ㄖ委熌康幕虻墨@

2、得、靶細胞的選擇與培養(yǎng)、載體的選擇、將目的基因導入靶細胞、轉導細胞的選擇和鑒定以及基因治療的安全性監(jiān)測及療效評價等。
　　 Bcl-2基因即B細胞淋巴瘤/白血病-2基因,是一種原癌基因,它具有抑制凋亡的作用,目前已經發(fā)現了一系列與Bcl-2同源的蛋白,構成Bcl-2基因家族,按功能分為兩類,一類是像Bcl-2一樣具有抑制凋亡的作用,另一類是具有促進凋亡的作用,其中以Bax研究最為廣泛,Bax具有強大的促進細胞凋亡作用的基因,如果

3、能夠實現腫瘤細胞Bax基因的高表達,將促進腫瘤細胞的凋亡。故推測應用基因重組技術構建Bax基因表達質粒,并將重組質粒轉入卵巢癌細胞內提高Bax基因在細胞內的表達可誘導細胞凋亡。
　　 研究目的：
　　 檢測Bax基因對體外培養(yǎng)的人卵巢癌細胞系Ovcar3的促凋亡作用。
　　 研究方法：
　　 采用基因重組技術構建Bax基因表達質粒,經DNA測序鑒定并證實其序列正確。并構建Bax基因表達載體(PCDNA3-

4、Bax),將實驗分為空白對照組、PCDNA3組、PCDNA3-Bax組。利用脂質體轉染法將2種載體轉染人卵巢癌細胞系Ovcar3。應用蛋白印跡法(Westernblot)、反轉錄PCR、流式細胞術、MTT檢測轉染后各組細胞中活性Caspase-3蛋白的表達情況、Bax基因表達水平、細胞的凋亡率、細胞存活率。
　　 研究結果：
　　 1、成功構建表達Bax基因的載體PCDNA3-Bax。
　　 2、Bax基因促進人