UCHL1對卵巢癌細胞增殖、凋亡和順鉑耐藥的影響及其機制研究.pdf

1、UCHL1，全稱為ubiquitincarboxyl-terminalhydrolaseL1，是一種去泛素化酶，也是泛素羧基末端酯酶家族的一員。UCHL1最初被發(fā)現(xiàn)表達于腦部組織及睪丸/卵巢，其中在神經(jīng)元中表達量甚至可以占到總蛋白的2％。UCHL1在腦組織中的低表達及一些特定位點的突變能導致阿爾茨海默氏病及帕金森癥等神經(jīng)退行性疾病。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)UCHL1在多種惡性腫瘤中有異常表達現(xiàn)象，并揭示了其在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。然而

2、，UCHL1在不同腫瘤中的功能卻并不一致。在非小細胞肺癌、腎細胞癌等腫瘤中，UCHL1具有促進腫瘤增殖和遷移的能力，被認為是癌基因;而在乳腺癌、前列腺癌等腫瘤中，UCHL1卻抑制細胞增殖并促進細胞凋亡，從而具有抑癌基因的作用。然而在卵巢癌中，除了一篇文獻報道UCHL1基因啟動子區(qū)存在一定程度的超甲基化外，有關(guān)其功能的研究卻未見報道。
　　 在本文的第一部分，我們發(fā)現(xiàn)通過shRNA干擾技術(shù)使UCHL1低表達后，兩個卵巢癌細胞系A(chǔ)2

3、780及IGROV1的增殖能力增強，同時凋亡水平降低。雖然IGROV1-shUCHL1與其對照相比凋亡水平并未呈現(xiàn)出統(tǒng)計顯著性差異，但同樣是凋亡減少的趨勢。用順鉑誘導細胞凋亡后，低表達UCHL1的細胞其凋亡水平也更低。我們進一步發(fā)現(xiàn)，低表達UCHL1的細胞具有更高的順鉑耐藥能力（IC50值）。為了考察UCHL1表達量與順鉑耐藥性之間的關(guān)系，我們在7個卵巢癌細胞系中檢測了其UCHL1的mRNA及順鉑耐藥能力。結(jié)果表明，UCHL1表達量越高

4、，對順鉑越敏感;UCHL1表達量越低，對順鉑越耐受。UCHL1的表達量與IC50值之間具有負相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為-0.96(p＜0.001)。我們分析了一篇已發(fā)表文獻中卡鉑（也是鉑類化合物，生化特征與順鉑很相似）敏感的卵巢癌病人與卡鉑耐藥卵巢癌病人的基因芯片數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)卡鉑敏感病人其UCHL1表達量高，而耐藥病人其UCHL1表達量低。接下來，我們發(fā)現(xiàn)UCHL1的表達量與其啟動子區(qū)超甲基化狀態(tài)相關(guān)。UCHL1表達量高的細胞系，其啟動子區(qū)不存

5、在超甲基化;而表達量低的細胞系，其啟動子區(qū)無一例外地存在超甲基化。去甲基化藥物處理UCHL1表達量低的細胞系能提高UCHL1的表達，更進一步確定了其啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。
　　 本文的第二部分，我們對低表達UCHL1引起的生物學現(xiàn)象進行了機制上的研究。首先，我們對低表達UCHL1前后的卵巢癌細胞做了全基因組芯片。對芯片數(shù)據(jù)分析后我們發(fā)現(xiàn)，表達差異在2倍以上的基因富集在細胞凋亡相關(guān)的生物學過程中，這個結(jié)果說明UCHL1主要參與調(diào)控

6、細胞的凋亡過程。我們還分析得到了一系列UCHL1調(diào)控的細胞凋亡相關(guān)基因，其中BCL2表達上調(diào)引人注目。我們還發(fā)現(xiàn)BCL2家族的另一成員Bax表達下調(diào)，而作為關(guān)鍵的凋亡調(diào)節(jié)基因p53，其表達量并無顯著改變。重新低表達BCL2后細胞增殖放緩，順鉑誘導產(chǎn)生的凋亡增加，而且順鉑IC50值也減少。另外我們還發(fā)現(xiàn)低表達UCHL1的細胞磷酸化AKT表達上升，說明AKT通路在一定程度活性增加。這些結(jié)果表明，低表達UCHL1很可能是通過上調(diào)BCL2及AK