SiRNA誘導(dǎo)的ERCC1抑制對卵巢癌細胞順鉑耐藥的影響.pdf

1、背景和目的: 鉑類化合物是腫瘤病人化療的主要藥物之一，其抗癌作用機理是與DNA分子結(jié)合，形成所謂的鉑-DNA加合物（Pt-DNA加合物），干擾DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，從而達到抗癌的作用，但現(xiàn)在臨床上對鉑類藥物化療（順鉑，卡鉑和氧鉑）的耐藥越來越成為腫瘤病人的一個主要問題。對鉑類藥物耐藥是多因素的，核苷酸修復(fù)途徑（NER）是一種主要的機制，ERCC1參與的損傷識別和剪切是NER中的限速步驟，在順鉑-DNA加和物的修復(fù)過程中非常重要，與腫瘤細胞順

2、鉑耐藥水平相關(guān)。本實驗通過SiRNA技術(shù)抑制ERCC1基因的表達，探討其對卵巢癌細胞對鉑類藥物耐藥性的影響。
　　 方法: 構(gòu)建ERCC1基因特異性SiRNA的表達載體PgenesiL-1/ERCC11和PgenesiL-1/ERCC12，體外轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞A2780/DDP,采用RT-PCR及Western Blot分析人卵巢癌細胞ERCC1基因mRNA及蛋白表達水平變化；采用MTT實驗研究細胞對鉑類藥物耐藥性的影響。

3、>　　 結(jié)果: SiRNA轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞A2780/DDP后，ERCC1基因轉(zhuǎn)錄水平明顯下降(與空白組和對照組相比，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC11處理后抑制了35±5%，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC12處理后37±4%)；蛋白表達水平也明顯下降(與空白組和對照組相比，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC11處理后抑制了69±4%，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC12處理后62±2%)，MTT實驗表明，細胞對順鉑的耐藥性降低(經(jīng)P