SiRNA誘導(dǎo)的ERCC1抑制對(duì)卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的影響.pdf

1、背景和目的: 鉑類化合物是腫瘤病人化療的主要藥物之一，其抗癌作用機(jī)理是與DNA分子結(jié)合，形成所謂的鉑-DNA加合物（Pt-DNA加合物），干擾DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，從而達(dá)到抗癌的作用，但現(xiàn)在臨床上對(duì)鉑類藥物化療（順鉑，卡鉑和氧鉑）的耐藥越來(lái)越成為腫瘤病人的一個(gè)主要問(wèn)題。對(duì)鉑類藥物耐藥是多因素的，核苷酸修復(fù)途徑（NER）是一種主要的機(jī)制，ERCC1參與的損傷識(shí)別和剪切是NER中的限速步驟，在順鉑-DNA加和物的修復(fù)過(guò)程中非常重要，與腫瘤細(xì)胞順

2、鉑耐藥水平相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)SiRNA技術(shù)抑制ERCC1基因的表達(dá)，探討其對(duì)卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物耐藥性的影響。
　　 方法: 構(gòu)建ERCC1基因特異性SiRNA的表達(dá)載體PgenesiL-1/ERCC11和PgenesiL-1/ERCC12，體外轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞A2780/DDP,采用RT-PCR及Western Blot分析人卵巢癌細(xì)胞ERCC1基因mRNA及蛋白表達(dá)水平變化；采用MTT實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞對(duì)鉑類藥物耐藥性的影響。

3、>　　 結(jié)果: SiRNA轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞A2780/DDP后，ERCC1基因轉(zhuǎn)錄水平明顯下降(與空白組和對(duì)照組相比，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC11處理后抑制了35±5%，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC12處理后37±4%)；蛋白表達(dá)水平也明顯下降(與空白組和對(duì)照組相比，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC11處理后抑制了69±4%，經(jīng)PgenesiL-1/ERCC12處理后62±2%)，MTT實(shí)驗(yàn)表明，細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性降低(經(jīng)P