MicroRNA-16調(diào)控細(xì)胞周期對卵巢癌順鉑耐藥的影響.pdf

1、目的:探討MicroRNA-16通過調(diào)節(jié)靶基因CCND1及蛋白表達(dá)產(chǎn)物CyclinD1(細(xì)胞周期相關(guān)蛋白D1)，參與上皮性卵巢癌耐藥細(xì)胞周期調(diào)控進(jìn)程，并研究其與順鉑耐藥的關(guān)系。
　　 方法:MicroRNA-16成體模擬物(mimics)及其陰性對照片段(negative control NC)以脂質(zhì)體Lipofectamine2000為載體成功轉(zhuǎn)染于人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株SKOV3/DDP細(xì)胞;實(shí)時熒光定量PCR檢測各實(shí)驗(yàn)組細(xì)

2、胞中miR-16的相對表達(dá)量;四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測耐藥細(xì)胞株耐藥系數(shù)及轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞順鉑的半數(shù)抑制濃度;流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后各組細(xì)胞細(xì)胞周期變化;Western-blot蛋白印跡法檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1蛋白表達(dá)量的變化。應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用One-wayANOVA單因素方差分析，兩組組間比較均采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差別有顯著性。
　　 結(jié)果:SKOV3/DDP細(xì)胞株的耐藥系數(shù)=

3、4.90; SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-16表達(dá)水平較SKOV3細(xì)胞明顯降低，差異有顯著性意義(P=0.000)，轉(zhuǎn)染miR-16 mimics后SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-16水平較轉(zhuǎn)染前明顯升高(P=0.001); SKOV3/DDP細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-16 mimics后，順鉑半數(shù)抑制濃度(10.69±1.08)與轉(zhuǎn)染NC細(xì)胞(18.23±2.10)相比明顯降低(P=0.001); SKOV3/DDP細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染miR-16后

4、，G1期細(xì)胞所占比例上升，差異有顯著性意義(P＜0.01);在蛋白水平，耐藥株SKOV3/DDP較SKOV3細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1蛋白相對表達(dá)量明顯升高，轉(zhuǎn)染miR-16 mimics后CyclinD1相對表達(dá)量明顯下降，差異有顯著性意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:microRNA-16可能通過調(diào)控靶向負(fù)性調(diào)控CCND1基因及其蛋白表達(dá)產(chǎn)物CyclinD1，參與上皮性卵巢癌細(xì)胞周期的進(jìn)程，并逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥細(xì)胞株的耐