甲基蓮心堿對人卵巢癌順鉑耐藥逆轉(zhuǎn)的體外研究.pdf

1、目的: 研究甲基蓮心堿(neferine,NEF)對人卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP增殖、對耐藥細(xì)胞內(nèi)順鉑敏感作用及細(xì)胞內(nèi)GST-π( glutathione S-transferase-π)基因表達(dá)的影響,初步探討NEF對人卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP的逆轉(zhuǎn)作用,為臨床開發(fā)應(yīng)用NEF作為化療增敏藥及耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供實驗依據(jù)。
　　方法: (1)體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及其耐順鉑細(xì)胞株SKOV3/DDP至對數(shù)生長期;(

2、2)采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測GST-π蛋白在人卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá);(3)采用細(xì)胞毒實驗(MTT)法篩選NEF對耐藥株的無毒劑量,并測定無毒劑量Nef干預(yù)SKOV3/DDP后耐藥性變化;(4)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測耐藥細(xì)胞和親本敏感細(xì)胞GST-πmRNA水平表達(dá)的差異,分析NEF對GST-π表達(dá)的影響。
　　結(jié)果: (1)單用NEF對SKOV3/DDP細(xì)胞生長有抑制作用,且隨活性濃度增加增殖抑制率相應(yīng)上升,該作

3、用與藥物劑量呈依賴關(guān)系,1、5、10 ug/ml NEF對細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性,(細(xì)胞抑制率小于10％),本實驗選用無毒劑量10ug/ml作為逆轉(zhuǎn)劑量;當(dāng)DDP與無毒劑量NEF聯(lián)合作用時,使DDP對SKOV3/DDP的IC50分別下降,且逆轉(zhuǎn)倍數(shù)隨藥物作用時間延長而增大,分別為1.15、1.91、2.28倍,各時間組間有顯著統(tǒng)計學(xué)意義( P<0.01);(2)免疫細(xì)胞化學(xué)染色后,鏡下SKOV3/DDP細(xì)胞中GST-π表達(dá)高于敏感SKOV3