EVn-50增強人卵巢癌順鉑耐藥株COC1-DDP對順鉑敏感性的研究.pdf

1、目的：觀察黃荊子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitex negundo seed, EVn-50）和順鉑（cisplatin, DDP）及兩者合用對人卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株COC1/DDP凋亡的影響，探討EVn-50增敏DDP誘導(dǎo)人卵巢癌耐順鉑細(xì)胞COC1/DDP凋亡的機制。
　　方法：
　　1. MTT法檢測EVn-50增強DDP抑制COC1/DDP細(xì)胞增殖的作用；
　　2.流

2、式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry, FCM）檢測EVn-50、DDP及兩者聯(lián)合作用于COC1/DDP細(xì)胞48 h后細(xì)胞凋亡率的變化；
　　3. Hoechst33258染色檢測EVn-50、DDP及兩者聯(lián)合作用于COC1/DDP細(xì)胞48 h后細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；
　　4.Western blot分析EVn-50、DDP及兩者聯(lián)合作用對COC1/DDP細(xì)胞蛋白表達(dá)變化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法顯

3、示：不同濃度EVn-50（20、40、60、80、100μg/mL）對COC1/DDP細(xì)胞的抑制率不同，同一濃度在不同的時間段（24 h、48 h、72 h）對COC1/DDP細(xì)胞的抑制率也不同，呈現(xiàn)時間-劑量依賴性，各藥物處理組與空白組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。計算EVn-50作用于COC1/DDP細(xì)胞48 h IC50值為56.34μg/mL；
　　2.MTT法還顯示：低濃度EVn-50（20μg/mL）與DDP（

4、1、10、30、60、100μg/mL） 聯(lián)合作用于COC1/DDP細(xì)胞48 h，與DDP（1、10、30、60、100μg/mL）單藥組相比，使DDP的IC50值由39.04μg/mL降至26.39μg/mL，耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.5倍；
　　3.流式細(xì)胞術(shù)（FCM）顯示：各組處理COC1/DDP細(xì)胞48 h后，空白對照組、EVn-50（20μg/mL）組、DDP（30μg/mL）組及EVn-50（20μg/mL）與DDP

5、（30μg/mL）聯(lián)合組調(diào)亡率分別為4.50％±1.30%、9.80%±1.70%、20.50%±3.70%、50.90%±2.90%。各處理組之間有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；
　　4. Hoechst33258染色顯示：各處理組均出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變，如核固縮、核碎裂、染色質(zhì)邊集、凋亡小體形成等，EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）聯(lián)合組的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯多于兩單藥組；
　　5.Western bl

6、ot顯示：空白對照組、EVn-50（20μg/mL）組、DDP（30μg/mL）組及EVn-50（20μg/mL）與DDP（30μg/mL）聯(lián)合組作用于COC1/DDP細(xì)胞48 h，Caspase-3蛋白表達(dá)增加（P<0.05），平均相對灰度值分別為0.984±0.028、1.710±0.150、2.433±0.151、2.825±0.153；各組均有PCNA表達(dá)，EVn-50（20 ug/mL）組與空白對照組相比PCNA蛋白表達(dá)下調(diào)（

7、P<0.05），EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）聯(lián)合組與DDP（30μg/mL）組相比PCNA蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；在DDP組（30μg/mL），EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）組出現(xiàn)了單泛素化修飾的PCNA（Ubi-PCNA），且EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）組與DDP組（30μg/mL）相比Ubi-PCNA蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論