基因芯片技術(shù)檢測TSA誘導(dǎo)MOLT-4細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)的改變TSA增強(qiáng)人卵巢癌順鉑耐藥株C13-對(duì)順鉑敏感性的體外研究.pdf

1、目的：利用基因芯片技術(shù)檢測TrichostatinA(TSA)誘導(dǎo)MOLT-4細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)的改變，分析、鑒定、驗(yàn)證與凋亡相關(guān)差異表達(dá)基因。 方法：確定不同濃度、時(shí)間TSA處理人白血病細(xì)胞株MOLT-4后凋亡發(fā)生的進(jìn)程，選擇200nmol/L濃度TSA誘導(dǎo)MOLT-4細(xì)胞凋亡，分別收集9、18h時(shí)段細(xì)胞制備人14K基因表達(dá)譜芯片，對(duì)基因芯片結(jié)果加以分析、篩選，選擇差異表達(dá)顯著的基因STAT5a用RT-PCR和westernb

2、lot予以驗(yàn)證，并對(duì)其機(jī)制作初步的探討。結(jié)果：200nmol/LTSA誘導(dǎo)的MOLT-4細(xì)胞凋亡在8h啟動(dòng)，于36h達(dá)到高峰。分別于9、18h收集細(xì)胞，提取RNA后進(jìn)行基因芯片分析。所得的結(jié)果經(jīng)過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，MOLT-4細(xì)胞差異表達(dá)基因隨著TSA作用時(shí)間的延長而增加，DAPK3、STK4、TNFRSF25、IER3等一批基因與凋亡的發(fā)生相關(guān)。選定STAT5a加以驗(yàn)證證實(shí)在TSA處理MOLT-4細(xì)胞后其基因和蛋白水平一定時(shí)間內(nèi)有不

3、同程度的下調(diào)。反義寡核苷酸封閉MOLT-4細(xì)胞中STAT5a后經(jīng)200nmol/LTSA處理，MOLT-4細(xì)胞凋亡率較未經(jīng)反義封閉的TSA處理的MOLT-4細(xì)胞有顯著上升(p＜0.05)。 結(jié)論：TSA引起MOLT-4細(xì)胞基因表達(dá)的顯著變化，STAT5a介導(dǎo)了TSA誘導(dǎo)的MOLT-4細(xì)胞的凋亡。 課題二 TSA增強(qiáng)人卵巢癌順鉑耐藥株C13*對(duì)順鉑敏感性的體外研究 目的：本研究探討組蛋白去乙酰化酶抑制劑tr

4、ichostatinA(TSA)聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)處理人卵巢癌順鉑耐藥株C13*的協(xié)同效應(yīng)。 材料和方法：MTT法觀察TSA、DDP、TSA+DDP對(duì)C13*細(xì)胞增殖的影響；克隆形成實(shí)驗(yàn)分別檢測DDP、TSA+DDP處理C13*的克隆形成率；流式細(xì)胞儀檢測凋亡和分析細(xì)胞周期；Hochest33258觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)。 結(jié)果：40nmol/LTSA處理C13*12h，細(xì)胞的凋亡率為2.99％，MTT顯示生長未受明顯