PDCD5基因增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡敏感性的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的:
　　本研究擬從體內(nèi)和體外兩個(gè)水平探索PDCD5基因?qū)τ陧樸K誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡的作用及可能機(jī)制。
　　方法:
　　第一部分:體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞,運(yùn)用脂質(zhì)體將PDCD5重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率,MTT法及流式細(xì)胞儀檢測PDCD5單獨(dú)轉(zhuǎn)染和聯(lián)合順鉑處理后的細(xì)胞凋亡情況;Western blot法檢測A549細(xì)胞及轉(zhuǎn)染PDCD5重組質(zhì)粒后的A549細(xì)胞中PDCD5、Bcl-2及Surv

2、ivin蛋白的表達(dá)。
　　第二部分:建立裸鼠A549肺癌模型,將25只裸鼠隨機(jī)分為5組:空白對照(N-null)組、脂質(zhì)體-pcDNA3.1(lip-null)組、脂質(zhì)體-PDCD5(lip-PDCD5)組、順鉑(DDP)組和聯(lián)合治療(PDCD5+DDP)組。觀察腫瘤生長情況,繪制腫瘤生長曲線圖;原位TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況,計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI);免疫組化法檢測PDCD5、Bcl-2、Survivin蛋白表達(dá)情況。

3、　　結(jié)果:
　　1、RT-PCR結(jié)果顯示PDCD5成功轉(zhuǎn)染入A549細(xì)胞,在A549/PDCD5組表達(dá)明顯高于A549組及A549/neo組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MTT及流式結(jié)果顯示PDCD5聯(lián)合順鉑處理后A549/PDCD5組細(xì)胞凋亡率明顯高于A549/neo組和A549組。Western blot結(jié)果顯示,PDCD5在A549/PDCD5組中表達(dá)明顯高于A549組及A549/neo組,Bcl-2、Survivi

4、n蛋白則呈低水平表達(dá)。
　　2、與其他4組比較,PDCD5+DDP組的腫瘤體積明顯減小(P<0.05),TUNEL結(jié)果顯示AI明顯升高(P均<0.05);與對照組、脂質(zhì)體-pcDNA3.1組、脂質(zhì)體-PDCD組、DDP組比較,脂質(zhì)體-PDCD組、PDCD5+DDP組的PDCD5蛋白表達(dá)升高,Bcl-2、Survivin蛋白表達(dá)降低,PDCD5蛋白與Bcl-2、Survivin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
　　結(jié)論: