乳酸菌培養(yǎng)上清液增強三陰性乳腺癌細胞對順鉑的敏感性的研究.pdf

1、背景及目的：
　　三陰性乳腺癌在臨床上預后較差，常用采用化療。常用的藥物順鉑(DDP)可作為三陰性乳腺癌的解救治療藥物或是術后復發(fā)的二線化療藥物。DDP的作用機制是干擾DNA的復制，其靶點在DNA的嘌呤與嘧啶的堿基，具有細胞毒性，有較強的殺腫瘤效果。臨床上，順鉑耐藥問題日益嚴重，設法提高原有藥物的敏感性，避免藥物劑量依賴性增加的不良反應，成為研究的一個熱點。
　　Piwil2是癌-睪丸基因家族中的一員，僅表達于睪丸生精細胞，

2、而其他組織均未見表達。近年來發(fā)現(xiàn)，Piwil2可修復DNA的損傷，這種現(xiàn)象提示了腫瘤中高表達Piwi12可能是DDP的一種新的耐藥機制。
　　近年來，乳酸菌的多種有益功能，包括調節(jié)腸道菌群、調節(jié)免疫、抗腫瘤等功效被發(fā)現(xiàn)，使得關于乳酸菌的研究逐漸成為熱點。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌培養(yǎng)上清液可下調Piwi12基因在乳腺癌細胞的表達。
　　綜上，由于DDP的殺腫瘤機制與破壞腫瘤的DNA復制有關，Piwil2基因又與DNA修復緊密聯(lián)系，同時

3、研究發(fā)現(xiàn)，沉默宮頸癌細胞Piwil2基因的表達能夠增強宮頸癌細胞對DDP的敏感性，而在乳腺癌細胞系中未見文獻報道;又有研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌培養(yǎng)上清液(LS)可下調MDA-MB-231乳腺癌細胞中Piwil2基因的表達。根據以上依據可提出問題，Piwil2是否與DPP耐藥有關，以及LS能否通過下調Piwil2增敏DDP?故本研究目的是驗證LS能否下調Piwil2基因，以及探究LS能否增強三陰性乳腺癌細胞對DDP的敏感性。
　　方法：

4、r>　　采用CCK8試劑盒和Western blotting檢測不同劑量DDP(0、1、2、3、4、5μg/ml)對三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-231增殖的基線情況和Piwil2基因表達水平的影響;瞬時轉染Piwil2siRNA沉默MDA-MB-231細胞中Piwil2基因表達，Western blotting檢測siRNA沉默效果，CCK8檢測Piwil2基因沉默后，對MDA-MB-231乳腺癌細胞增殖的影響情況;采用CCK8分析

5、和Western blotting檢測和不同濃度LS(1％、5％、10％、20％(v/v))與2μg/ml DDP聯(lián)合不同濃度LS(1％、5％、10％、20％(v/v))處理MDA-MB-231細胞，檢測細胞增殖的抑制效應和Piwil2蛋白表達水平的變化。
　　結果：
　　當濃度＞3μg/ml時DDP可明顯抑制MDA-MB-231細胞的增殖(P＜0.05)，而濃度＜2μg/ml時DDP不能有效抑制細胞的增殖;DDP以劑量依賴

6、性的方式上調Piwil2蛋白的表達;siRNA沉默Piwil2的表達能夠逆轉2μg/ml DDP對細胞增殖的抑制。與MRS組比較，LS以劑量依賴性方式下調Piwil2蛋白的表達但并不會影響細胞的增殖;與單用2μg/ml DDP比較，2μg/ml DDP聯(lián)合20％LS處理細胞，Piwil2蛋白的表達明顯下調且細胞增殖也受到抑制(P＜0，05)。
　　結論：
　　三陰性乳腺癌細胞中Piwil2的高表達可導致細胞對順鉑敏感性的降低

7、;沉默Piwil2基因的表達增強三陰性乳腺癌細胞對順鉑的敏感性;乳酸菌培養(yǎng)上清液可通過下調Piwil2基因的表達增強三陰性乳腺癌細胞對順鉑的敏感性。
　　意義：
　　本實驗結果可能為三陰性乳腺癌細胞DDP耐藥提供一個新的機制，并且這是首次研究乳酸菌培養(yǎng)上清液與增敏DDP的關系，該試驗進一步鞏固了乳酸菌的“益生菌”地位，同時該療法可能是一種有效而無毒的、成本也較低廉的生物療法，進一步研究證實其作用和機制，可為其將來批量生產和臨