羅格列酮對人肺腺癌細(xì)胞A549生長抑制及增強(qiáng)順鉑敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過體外實(shí)驗(yàn)研究過氧化物酶體增殖因子活化受體（peroxisome proliferiator-adtvated receptor gammar，PPARγ）配體羅格列酮（Rosiglitazone，ROZ）單獨(dú)和與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對人肺腺癌A549細(xì)胞生長和凋亡的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞，分別或聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的羅格列酮、順鉑處理人肺腺癌A549細(xì)胞，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（tetrzo

2、lium-based colorimetric assay，MTT）比色法測定不同濃度的ROZ對人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用，選擇合適的實(shí)驗(yàn)劑量；采用流式細(xì)胞儀測定經(jīng)不同濃度的羅格列酮、順鉑處理人肺腺癌A549細(xì)胞后，細(xì)胞周期和凋亡率的改變；以及免疫細(xì)胞化學(xué)測定經(jīng)不同濃度ROZ作用后，人肺腺癌A549細(xì)胞內(nèi)PPARγ、NF-κB、survivin和caspase-3的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1 MTT檢測結(jié)

3、果顯示：50μmol/L以上濃度的羅格列酮可抑制體外培養(yǎng)的人肺腺癌A549細(xì)胞生長。不同濃度ROZ處理細(xì)胞24～72h后，各實(shí)驗(yàn)組OD值均有不同程度下降，與對照組相比，差異有顯著性（P<0.01）。隨著ROZ濃度的增加和作用時間的延長，OD值逐漸下降。不同濃度ROZ作用A549細(xì)胞24～72h后，抑制率由9.94％～48.2％增至25.6％～91.7％，ROZ對A549細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系和時間-效應(yīng)關(guān)系；1.25μ

4、mol/L羅格列酮對A549細(xì)胞無顯著毒性作用（IR<10％），與順鉑合用時能增強(qiáng)順鉑對A549細(xì)胞的增殖抑制作用（q>1.15）。
　　 2流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：50μmol/LROZ處理48時后，A549細(xì)胞的凋亡率為7.43±0.01％，100μmol/LROZ處理48小時后A549細(xì)胞的凋亡率上升為11.32±0.10％。隨ROZ濃度增加，G1期細(xì)胞逐漸增多，S期細(xì)胞逐漸減少。提示ROZ可阻滯A549細(xì)胞周期于G1/G

5、0期，該作用有劑量依賴性；48小時A549細(xì)胞的自然凋亡率為1.72±0.038％，1.25μmol/L的ROZ單獨(dú)處理A549細(xì)胞48小時后，細(xì)胞凋亡率為1.84±0.794％，提示1.25μmol/L的ROZ并不誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；不同濃度的DDP（1.0，2.0，4.0mg/L）與A549細(xì)胞作用48小時后，能誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡，并且與ROZ（1.25μmol/L）合用時，其凋亡率均有增加，DDP可使A549細(xì)胞G0/G1期增加，S

6、期細(xì)胞減少，呈濃度依賴方式。ROZ（1.25μmol/L）和DDP聯(lián)合組細(xì)胞周期與DDP組比較無明顯變化。
　　 3免疫組化法結(jié)果顯示：正常生長的A549細(xì)胞有PPARγ、NF-κB、Survivin，Caspase-3蛋白的表達(dá)，加入不同濃度的ROZ作用48小時后，ROZ低、高劑量組癌細(xì)胞中PPARγ蛋白的IHS值分別為：3.60±0.75、8.40±0.75，陰性對照組為1.40±0.24。ROZ各劑量組之間以及與陰性對照組

7、相比，差異有顯著性（P<0.05）。ROZ低、高劑量組癌細(xì)胞中NF-κB蛋白的IHS值分別為：4.80±0.49、2.40±0.40陰性對照組為8.40±0.60。ROZ各劑量組之間以及與陰性對照組相比，有顯著性差異（P<0.01）。ROZ低、高劑量組癌細(xì)胞中Survivin蛋白的IHS值分別為：6.80±0.80、2.80±0.49，陰性對照組為9.60±0.75。ROZ各劑量組之間以及與陰性對照組相比，有顯著性差異（P<0.01）。

8、ROZ低、高劑量組癌細(xì)胞中Caspase-3蛋白的IHS值分別為：3.20±0.49、6.00±0.63、陰性對照組為1.60±0.24。ROZ各劑量組與陰性對照組相比，有顯著性差異與對照組比較，NF-κB、Survivin蛋白的表達(dá)隨作用濃度的增加而減弱，而PPARγ、Caspase-3蛋白的表達(dá)隨ROZ作用濃度的增加而增加，且表達(dá)位置發(fā)生改變。
　　 結(jié)論：
　　 1 ROZ在一定劑量范圍內(nèi)能抑制肺腺癌A549細(xì)胞生