靶向EGFR的RNA干擾技術(shù)對非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株A549細胞抑制及順鉑敏感性的研究.pdf

1、利用RNA干擾（RNAi）技術(shù)，將攜帶表皮生長因子受體（EGFR）同源基因的重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌（NSCLC）細胞株A549細胞，觀察其對A549細胞生長抑制作用及對順鉑敏感性的變化。 方法： 根據(jù)RNA干擾原理，體外設(shè)計并合成靶向EGFR特異性干擾片段，即h-EGFR，以pGensil-1為載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGensil-1-EGFR（簡稱ds-EGFR），以Lipofectamine2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染肺腺癌細

2、胞株A549細胞，經(jīng)G418篩選后挑選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細胞，將所挑選出的單克隆細胞大量培養(yǎng)后與A549細胞對照組和轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的陰性對照組進行比較，并加入不同濃度順鉑（40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml），采用四甲基偶氮唑藍比色法（MTT）檢測細胞活力，繪制生長曲線，并計算細胞抑制率，流式細胞儀（FCM）分析細胞周期及細胞凋亡的變化，觀察RNAi對A549細胞抑制作用及是否與順鉑有協(xié)同作用. 結(jié)果： 1.

3、MTT檢測結(jié)果顯示，從第二天起ds-EGFR組生長緩慢，48h、72h、96h的吸光度分別為0.741±0.010、0.860±0.054、0.999±0.192，與對照組、陰性對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；ds-EGFR聯(lián)合不同濃度（40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml）的順鉑與等濃度順鉑相比，作用24h后，其抑制率分別提高了7.8％、30.70％、34.42％，提示ds-EGFR聯(lián)合順鉑或單獨順鉑對A549細

4、胞均有抑制作用，且隨著順鉑濃度的增加和時間的延長抑制作用增強。 2.細胞周期分析顯示，ds-EGFR組G0/G1細胞百分比較對照組增加了13.84％，較陰性對照組增加了14.65％，進入S期的細胞百分比較對照組減少了19.10％，較陰性對照組減少了18.68％；40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml順鉑處理細胞24h后，與對照組相比，凋亡率明顯增高（P<0.05），其凋亡率分別為34.40±1.21，16.30±1.19

5、，7.22±1.25，ds-EGFR聯(lián)合不同濃度順鉑（40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml）作用A549細胞24h后其凋亡率分別為37.12±1.99，17.93±1.13，10.42±1.45。ds-EGFR聯(lián)合順鉑與等濃度順鉑凋亡率比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。 結(jié)論： ds-EGFR可有效抑制A549細胞生長，使細胞阻滯在G0-G1期，并能提高細胞對順鉑的敏感性，且隨著順鉑濃度的增加，其抑制率增強，