Twist對(duì)A549細(xì)胞放療敏感性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分:Twist和VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義
　　目的:探討非小細(xì)胞肺癌中Twist和VEGF蛋白表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系及其臨床意義。
　　方法:采用免疫組織化學(xué) SP法檢測 Twist和VEGF蛋白在61例 NSCLC及癌旁組織中的表達(dá)情況,選取13例炎性假瘤作為良性疾病對(duì)照。
　　結(jié)果:Twist和VEGF在 NSCLC組織中的陽性表達(dá)率分別為73.8％和

2、77.0％,明顯高于癌旁組織和肺良性病變組織(P<0.05)。Twist和VEGF表達(dá)均與患者年齡、性別、病理類型、分化程度、臨床分期無關(guān)(P>0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。Twist和VEGF在 NSCLC中表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.738,P<0.01)。NSCLC患者 Twist陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者的1年無病生存(disease free survival,DFS)率分別為73.3％和87.5％,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

3、>0.05);VEGF陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者的1年 DFS率分別為74.5％和85.7％,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:Twist和VEGF高表達(dá)的NSCLC患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,兩者可能在NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移過程中起協(xié)同作用。Twist和VEGF陽性表達(dá)患者1年 DFS低于陰性表達(dá)者,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這可能與病例數(shù)偏少有關(guān)。
　　第二部分:shRNA下調(diào) Twist表達(dá)對(duì) A549細(xì)胞生物學(xué)行為和放療敏

4、感性的影響及機(jī)制研究
　　目的:探討 shRNA下調(diào) Twist表達(dá)對(duì) A549細(xì)胞生物學(xué)行為和放療敏感性的影響及其可能作用機(jī)制。
　　方法:構(gòu)建表達(dá)針對(duì) Twist mRNA的shRNA和不針對(duì)任何人 mRNA的陰性對(duì)照shRNA病毒顆粒,分別轉(zhuǎn)染 A549細(xì)胞。Western blot檢測 A549細(xì)胞空白組、陰性對(duì)照組、Twist沉默組三組細(xì)胞 Twist蛋白表達(dá)情況。MTT法檢測三組細(xì)胞增殖情況。克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測三組

5、細(xì)胞放療后增殖情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測三組細(xì)胞放療前后的周期分布和凋亡情況。Transwell小室檢測三組細(xì)胞放療后體外遷移、侵襲能力。Western blot檢測三組細(xì)胞放療后 p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:Twist沉默組較A549細(xì)胞空白組、陰性對(duì)照組Twist蛋白表達(dá)顯著降低。單純下調(diào)Twist表達(dá)對(duì)A549細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡無明顯影響(P>0.05)。Twist沉默組較陰性對(duì)照組放療增

6、敏比為1.31。Twist沉默組放療后G0/G1期細(xì)胞百分比(82.00％±2.72％)較空白組(63.66％±2.47％)、陰性對(duì)照組(69.43％±0.32％)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Twist沉默組放療后凋亡細(xì)胞百分比(13.88％±0.16％)較空白組(6.31％±0.57％)、陰性對(duì)照組(7.37％±0.67％)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。下調(diào)Twist表達(dá)可以抑制A549細(xì)胞放療后遷移和侵襲能力,

7、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。放療后Twist沉默組較空白組、陰性對(duì)照組p53、p21、Bax蛋白表達(dá)升高,Bcl-2蛋白表達(dá)降低。
　　結(jié)論:Twist-shRNA能夠顯著下調(diào) A549細(xì)胞 Twist表達(dá)。單純下調(diào) Twist表達(dá)對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期、凋亡無明顯影響。下調(diào) Twist表達(dá)可以增加 A549細(xì)胞放療敏感性,降低其放療后遷移侵襲能力。下調(diào) Twist表達(dá)增加 A549細(xì)胞放療后G0/G1期阻滯和凋亡。下調(diào)