RGC32基因在肺腺癌中表達改變的分子機制及其對肺腺癌A549細胞化療敏感性的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  肺癌是呼吸系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,在惡性腫瘤中的死亡率居首位,且呈逐漸上升趨勢,其中腺癌占40%以上。手術切除配合放、化療是目前治療肺癌的主要手段,但肺癌的高復發(fā)率、高病死率都是目前治療上存在的難題。所以,加強肺癌發(fā)病原因分子機制的研究尤為迫切。前期的檢測發(fā)現(xiàn)肺腺癌組織中RGC32基因存在表達異常。RGC32為重要的補體應答基因,在細胞增殖分化、炎癥反應、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等過程中起關鍵作用,從而參與人類許多疾病的發(fā)生發(fā)展過

2、程。本研究擬檢測RGC32基因在肺腺癌組織中的表達,明確其表達發(fā)生改變的原因;應用RNA干擾技術沉默肺腺癌A549細胞中RGC32蛋白的表達,檢測RGC32沉默對A549細胞凋亡、細胞生長抑制率和化療敏感性的影響,并探討p38信號通路在其中發(fā)揮的作用。
  方法:
  Real-time PCR檢測32例肺腺癌組織表達中的RGC32 mRNA表達。TargetScanHuman5.1等軟件預測能夠調(diào)控RGC32基因的micr

3、o-RNA,Real-timePCR檢測肺腺癌組織中miR-656表達。檢測miR-656前體對RGC32基因表達的影響。應用熒光素酶報告基因表達分析明確miR-656是否與RGC32基因3'UTR結(jié)合,負性調(diào)控RGC32基因的表達。
  應用Real-time PCR和Western blot驗證siRNA-RGC32對A549細胞中RGC32基因的沉默效果。應用MTT法及流式細胞儀觀察RGC32基因沉默的A549細胞增殖情況和

4、細胞凋亡情況;研究RGC32基因表達沉默是否能夠提高化療藥物DDP對A549細胞的作用效果。應用Western blot法檢測RGC32基因沉默時磷酸化p38蛋白在A549細胞表達的改變,并應用p38抑制劑SB203580抑制p-p38,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。
  結(jié)果:
  1、肺腺癌組織中RGC32 mRNA的表達
  Real-time PCR檢測32例肺腺癌組織表達中的RGC32 mRNA表達。結(jié)果顯示,

5、與癌旁組織相比,肺腺癌組織中RGC32 mRNA表達明顯增加。
  2、miR-656調(diào)控RGC32基因表達
  應用TargetScanHuman5.1等軟件,預測RGC32基因是miR-656的靶基因,在RGC32 mRNA-3'UTR有miR-656結(jié)合位點。Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比,肺腺癌組織中miR-656表達明顯增加。而且RGC32與miR-656的表達水平呈明顯負相關。miR-656前

6、體能夠顯著降低RGC32基因的表達。熒光素酶報告基因表達分析證實miR-656能夠與RGC32基因3'UTR結(jié)合,負性調(diào)控RGC32基因的表達。
  3、RGC32基因表達沉默對A549細胞生物學性狀的影響
  Real-time PCR和Western blot檢測證實,siRNA-RGC32能夠顯著抑制A549細胞中RGC32基因的表達。而RGC32基因表達沉默能夠顯著地抑制A549細胞的增殖能力,促進A549細胞凋亡。

7、
  4、RGC32基因表達沉默對A549細胞化療敏感性的影響
  RGC32基因表達沉默能夠顯著地提高化療藥物DDP對A549細胞的作用效果,DDP處理后的RGC32基因表達沉默的A549細胞的增殖能力進一步降低,凋亡率進一步增加。
  5、p38/MAPK通路在RGC32基因調(diào)控A549細胞凋亡中的作用。
  Real-time PCR和Western blot檢測證實,RGC32基因表達沉默能夠顯著上調(diào)A5

8、49細胞中p-p38蛋白的表達。應用p38抑制劑SB203580抑制A549細胞中上調(diào)的p-p38,A549細胞的凋亡率顯著降低。
  結(jié)論:
  1、RGC32基因在肺腺癌中表達顯著上調(diào),miR-656在肺腺癌中表達顯著降低,RGC32與miR-656的表達水平呈顯著地負相關。
  2、miR-656能夠通過與RGC32基因3'UTR特定序列靶向結(jié)合并負性調(diào)控RGC32基因的表達。
  3、RGC32基因在肺腺

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