Aurora A反義寡核苷酸對肺腺癌細(xì)胞A549的作用和對紫杉醇化療敏感性的影響.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分: Aurora A反義寡核苷酸對人肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞生長與細(xì)胞周期的影響。
　　 背景：Aurora A激酶是進化上保守的有絲分裂絲/蘇氨酸激酶Aurora 激酶家族成員之一，已在肺腺癌細(xì)胞A549中檢測到Aurora A的高表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)與肺癌的發(fā)生、染色體不穩(wěn)以及低分化密切相關(guān)。
　　 目的：探討下調(diào)Aurora A基因表達(dá)對肺癌細(xì)胞生長和細(xì)胞周期分布的影響。
　　 方法

2、：用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法介導(dǎo)Aurora A反義寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides，ASODN)處理肺腺癌細(xì)胞A549，RT-PCR及western-blot方法檢測Aurora A mRNA和蛋白表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布的變化，四唑氮藍(lán)法（MTT）檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞生長抑制率的變化。
　　 結(jié)果：Aurora A反義寡核苷酸作用于A549細(xì)胞后，細(xì)胞的生長抑制率呈劑量和時間依賴性，其中4

3、8h的IC50值約為300 nmol/L，在此濃度和時間下，Aurora A反義寡核苷酸可明顯降低Aurora A mRNA和蛋白的表達(dá)，且細(xì)胞周期阻滯于G2/M期和S期。
　　 結(jié)論：下調(diào)Aurora A表達(dá)可抑制肺腺癌細(xì)胞A549的增殖同時導(dǎo)致細(xì)胞阻滯于G2/M期及S期。
　　 第二部分: Aurora A反義寡核苷酸聯(lián)用紫杉醇對體外肺腺癌細(xì)胞A549生長的抑制作用。
　　 背景：紫杉醇是治療肺癌的第三代植物

4、堿類化療藥物，其作用于微管系統(tǒng)以導(dǎo)致細(xì)胞在有絲分裂時不能形成紡錘體和紡錘絲；同時Aurora A與微管紡錘體的裝配及穩(wěn)定性密切相關(guān)；理論上兩者具有共同的作用路徑。
　　 目的：探討在體外培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞A549中，Aurora A反義寡核苷酸對紫杉醇化療敏感性的影響，并分析其內(nèi)在機制。
　　 方法：用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法介導(dǎo)Aurora A反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotides，ASOD

5、N)處理肺腺癌A549細(xì)胞6h后，給予一定濃度的紫杉醇（PTX）繼續(xù)作用24h，用四唑氮藍(lán)法（MTT）觀察各組的量效反應(yīng)，并計算半數(shù)抑制濃度IC50的值。
　　 結(jié)果：Aurora A ASODN轉(zhuǎn)染增加了肺癌細(xì)胞A549對紫杉醇的敏感性，ASODN+紫杉醇組的細(xì)胞生長抑制率在30h達(dá)（70.51±1.77）%，明顯高于單用ASODN的（29.98±2.05）%(P<0.05)和紫杉醇的（33.61±1.57）%（P<0.05)