Med19基因敲除對不同P53背景乳腺癌細胞紫杉醇化療敏感性的影響.pdf

1、目的：探討Med19基因敲除是否增加不同P53背景乳腺癌細胞對紫杉醇化療的敏感性。
　　方法：以不同P53背景的乳腺癌細胞MCF-7（P53野生型）和MDA-MB-231（P53突變型）為研究對象，分別進行Med19 RNA干擾（RNAi）慢病毒感染（Med19基因敲除組，即KD組），并設(shè)置空載體感染對照組（NC組）和陰性對照組（CON組）組。熒光顯微鏡觀察慢病毒感染效率，Western Blot檢測 Med19、P53、磷酸化

2、P53（pP53）、P21蛋白的表達水平變化；MTT法檢測敲除Med19基因前后不同劑量紫杉醇對癌細胞的增殖抑制率，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡、細胞周期，觀察 Med19基因表達水平對不同P53背景乳腺癌細胞的紫杉醇化療敏感性的影響。
　　結(jié)果：與CON組和空載體組NC組相比，兩種乳腺癌細胞KD組的Med19蛋白表達水平顯著下降（P＜0.05）；MCF-7細胞的P53、pP53、P21蛋白表達上調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；

3、MDA-MB-231細胞的P53、pP53、 P21蛋白表達組間比較差異無顯著性（P＞0.05）。MTT實驗顯示，紫杉醇抑制兩種乳腺癌細胞的生長增殖，在濃度為（0.01～50）μg/ml范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，MCF-7、MDA-MB-231細胞增殖抑制率增加，呈濃度依賴性，不同濃度之間的比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）；在MCF-7細胞中紫杉醇對KD組的抑制率顯著高于CON組及NC組（P＜0.05），同時計算KD組IC50（6

4、.32±1.31）顯著低于CON（14.1±3.67）及NC組（13.5±3.23）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；MDA-MB-231細胞紫杉醇對KD組細胞組的抑制率雖高于CON組及 NC組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），KD組 IC50（9.58±2.38）較CON（13.13±3.48）及NC組（11.02±3.54）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。10μg/ml的紫杉醇作用于兩種乳腺癌細胞48h后，流式細胞術(shù)檢測到紫杉

5、醇作用于MCF-7細胞KD組細胞的凋亡率為（59.77±2．31）％顯著高于NC組（36.42±4.27）％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明敲除Med19基因后促進紫杉醇對MCF-7細胞的凋亡作用；作用于MDA-MB-231細胞KD組的凋亡率為（40.07±2.21）％，較作用于NC組的凋亡率（35.42±4.16）%雖有增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。細胞周期的檢測結(jié)果顯示，紫杉醇導(dǎo)致兩種乳腺癌細胞的KD組和NC組均

6、出現(xiàn)G2/M期阻滯；紫杉醇作用于 MCF-7細胞的KD組在導(dǎo)致 G2/M期阻滯的[（70.14±1.22）%]同時，G0/G1期細胞[（10.12±0.95）%]較紫杉醇作用于NC組[（5.52±0.78）%]顯著增加，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：Med19基因敲除增強野生型P53乳腺癌MCF-7細胞對紫杉醇化療的敏感性，其機制可能為Med19基因表達下調(diào)，可增強P53基因的表達活化，通過其下游基因P21，