iASPP對不同p53背景的胃癌細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響.pdf

1、目的：研究不同p53背景的胃癌細(xì)胞p53凋亡刺激蛋白(ASPP)的表達(dá)與順鉑化療敏感性的關(guān)系以及下調(diào)iASPP的表達(dá)，對不同p53背景的胃癌細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響。
　　 方法：
　　 (1)采用MTT法檢測不同濃度的順鉑對胃癌細(xì)胞AGS(p53野生型)及SGC-7901（p53突變型）在24h、48h、72h時的生長抑制作用。RT-PCR技術(shù)檢測胃癌細(xì)胞AGS和SGC-7901ASPP家族的表達(dá)水平，并分析該家族與順

2、鉑化療敏感性的關(guān)系。
　　 (2)構(gòu)建針對iASPP基因的短發(fā)卡RNA干擾(iASPP-shRNA)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞AGS和SGC-7901;利用RT-PCR技術(shù)檢測iASPPmRNA表達(dá)水平的變化。
　　 (3)下調(diào)胃癌細(xì)胞AGS及SGC-7901的iASPP的表達(dá)后，MTT法檢測順鉑對其生長抑制作用及流式細(xì)胞技術(shù)檢測凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 (1)胃癌細(xì)胞AGS、SGC-7901經(jīng)不同濃度的順

3、鉑化療不同時間后，細(xì)胞的增殖與空白對照組相比均受到抑制，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。相同濃度的順鉑化療相同時間，除24h6.00μg/ml及72h3.00μg/ml、6.00μg/ml、12.00μg/ml組之外，順鉑對AGS抑制率低于對SGC-7901的抑制率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；順鉑化療24h、48h、72h后，AGS半效抑制濃度(IC50)均高于SGC-7901，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);AGS與S

4、GC-7901ASPP家族的表達(dá)水平的比較，ASPP2的表達(dá)AGS低于SGC-7901，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);iASPP的表達(dá)AGS高于SGC-7901，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);ASPP1的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2)針對iASPP基因的短發(fā)卡RNA干擾(pGenesil-2.1-iASPPshRNA)質(zhì)粒構(gòu)建成功，并設(shè)有pGenesil-2.1-HK陰性對照和pGenesil-2.

5、1-KB空白對照；RT-PCR法檢測iASPP表達(dá)變化，轉(zhuǎn)染iASPP-shRNA的胃癌細(xì)胞AGS及SGC-7901，與對應(yīng)的轉(zhuǎn)染空載體pGenesil-2.1的細(xì)胞相比，iASPP表達(dá)均下調(diào)(P＜0.05)。
　　 (3)以3.00μg/ml順鉑作用24h后，AGS-iASPP-shRNA的生長抑制率（88.2±3.7）高于AGS-KB（54.3±1.8），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)：SGC-7901-iASPP-shR

6、NA的生長抑制率（68.3±2.3）高于SGC-7901-KB（63.2-1.5），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。以3.00μg/ml順鉑作用24h后，AGS-iASPP-shRNA的凋亡率（68.7±3.7）高于AGS-KB（21.5±1.9），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；SGC-7901-iASPP-shRNA的凋亡率（38.5±2.9）高于SGC-7901-KB（32.4±2.2），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。AG

7、S-iASPP-shRNA與AGS-KB凋亡率差值高于SGC-7901-iASPP-shRNA與SGC-7901-KB凋亡率差值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：p53野生型胃癌細(xì)胞AGS對順鉑化療的敏感性低于p53突變型胃癌細(xì)胞SGC-7901;相比SGC-7901的ASPP家族的表達(dá)水平，AGS細(xì)胞ASPP2低表達(dá)、iASPP高表達(dá)，而ASPP1無差異；iASPP表達(dá)水平的變化可以影響胃癌細(xì)胞的化療敏感性，其