慢病毒介導(dǎo)STAT3-shRNA對(duì)胃癌細(xì)胞化療敏感性的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:目前，胃癌已發(fā)展為世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，致死率在惡性腫瘤中居于第二位[1]。隨著醫(yī)療技術(shù)發(fā)展，早期胃癌生存率較前顯著提升，但晚期胃癌生存率卻不容樂(lè)觀，晚期或轉(zhuǎn)移型的胃癌患者5年生存率僅為5-20％[2]。對(duì)于此類(lèi)患者而言，化療是其臨床治療策略的關(guān)鍵?；熤饕ㄟ^(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡從而發(fā)揮抗腫瘤作用，但由于腫瘤細(xì)胞先天或者獲得性對(duì)化療耐受，導(dǎo)致胃癌臨床化療效果差，生存率改善不明顯。臨床上僅通過(guò)改變化療藥物組合的方式對(duì)癌細(xì)胞耐藥的

2、改善作用十分有限，迫切需要對(duì)如何改善胃癌細(xì)胞的化療敏感性進(jìn)一步探索。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，對(duì)胃癌分子特征的研究不斷深入，能否在基因水平上逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞的化療抵抗性引起了廣泛科研工作者關(guān)注。
　　信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducers and activators of transcription3，STAT3），是轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，在多種生理及病理過(guò)程中扮演著調(diào)節(jié)器的關(guān)鍵作用。STAT3基因通過(guò)轉(zhuǎn)位到

3、細(xì)胞核，與特定的啟動(dòng)子序列結(jié)合，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、血管生成等生理過(guò)程[3]。最近的研究表明，STAT3與多種腫瘤細(xì)胞的化療抵抗性有關(guān)，但是否在胃癌細(xì)胞中也能誘導(dǎo)化療耐受并不明確。
　　方法:1.首先構(gòu)建靶向STAT3基因的shRNA干擾序列，以慢病毒為載體介導(dǎo)STAT3-shRNA轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞。以real-time PCR及western blot檢測(cè)STAT3-shRNA干擾效

4、果。2.通過(guò)MTT法分析干擾STAT3表達(dá)后胃癌SGC-7901細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶（5-Fu）化療敏感性的變化；用流式細(xì)胞分析儀比較細(xì)胞凋亡率的差異；最后通過(guò)western blot檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1及survivin的變化，初步探討相關(guān)機(jī)制。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建靶向STAT3基因的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞，有效抑制55％STAT3 mRNA表達(dá)和40％STAT3蛋白表達(dá)（P＜0.05）。MTT及流式

5、細(xì)胞儀檢測(cè)顯示干擾STAT3表達(dá)后可抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡(P＜0.05)，western blot顯示STAT3下游靶基因Bcl-2、Mcl-1及survivin蛋白表達(dá)水平顯著下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：慢病毒介導(dǎo)的STAT3-shRNA可阻斷人胃癌SGC-7901細(xì)胞的STAT3信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，下調(diào)該通路下游的抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、survivin的活性，