升溫對(duì)人胃癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株化療敏感性的影響.pdf

1、目的:探討紫杉醇(Paclitaxel,TAX)化療聯(lián)合熱療對(duì)胃癌 TAX敏感細(xì)胞株MKN-45及 TAX耐藥細(xì)胞株 MKN-45/TAX的影響,探討靶向多藥耐藥基因1(multiple-drug resistance gene1, MDR1)的siRNA對(duì)MKN-45/TAX多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用,為臨床應(yīng)用熱化療提供理論依據(jù)。
　　方法:1、通過濃度梯度遞增法建立胃癌TAX耐藥細(xì)胞株,命名為MKN-45/TAX。2、采用細(xì)胞增殖

2、試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)法檢測(cè)不同溫度和不同TAX濃度作用下2種細(xì)胞的增殖抑制率。3、采用反轉(zhuǎn)錄–聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法、蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)法、免疫細(xì)胞化學(xué)染法檢測(cè)在不同溫度作用下, MKN-45/TAX和MKN-45細(xì)胞株的體外藥物敏感性,多藥耐藥相關(guān)基因MDR1在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)。4、采用RT-PCR

3、檢測(cè)經(jīng)靶向siRNA處理前后MDR1 mRNA表達(dá)水平的變化;Western blot法檢測(cè)經(jīng)靶向siRNA處理前后 P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的變化。5、構(gòu)建介孔二氧化硅納米顆粒負(fù)載siRNA靶向沉默MDR1基因;RT-PCR法、Western blot法檢測(cè)沉默效果。
　　結(jié)果:l、成功建立 MKN-45/TAX。2、MDR1在MKN-45/TAX中高表達(dá)而在MKN-45中低表達(dá)。3、在MKN-45

4、及MKN-45/TAX中,隨著TAX濃度的增加對(duì)化療藥物增殖抑制率增加;42℃時(shí)MKN-45/TAX對(duì)TAX化療藥物的增殖抑制率降低,而MKN-45則升高。4、轉(zhuǎn)染siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表達(dá)水平均下降。5、介孔二氧化硅納米顆粒負(fù)載siRNA靶向沉默MDR1基因較單純siRNA沉默效果好。
　　結(jié)論:1、熱療本身具有殺滅腫瘤細(xì)胞的作用,聯(lián)合TAX化療可增強(qiáng)MKN-45/TAX對(duì)化療的耐藥性,而增強(qiáng)MKN-45對(duì)化