全反式維甲酸增強順鉑對A549細(xì)胞化療敏感性及其對bcl-2和P53基因表達(dá)的影響.pdf

1、肺癌在現(xiàn)代社會中的患病率和死亡率越來越高，已成為危害人類健康的頭號殺手，逐年增加的發(fā)病率和病死率越來越引起醫(yī)務(wù)工作者甚至廣大社會人群的重視。關(guān)于肺癌發(fā)病機制及新興治療方案的研究越來越深入，人們逐漸認(rèn)識到腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體凋亡機制障礙密切相關(guān)。全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，在抗腫瘤方面具有獨到優(yōu)勢。關(guān)于ATRA誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的具體機制已有研究，但

2、仍缺乏統(tǒng)一的觀點，現(xiàn)在已公認(rèn)bcl-2及P53基因在凋亡過程中發(fā)揮扮演著不可替代的重要角色，關(guān)于二者對凋亡過程的影響機制已基本明晰。
　　目前，中晚期肺癌患者仍以化療為主，鉑類聯(lián)合其他化療藥物仍是晚期非小細(xì)胞肺癌標(biāo)準(zhǔn)一線化療方案，但鉑類所致不良反應(yīng)較多，除具有較嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)、腎毒性、耳毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷等不良反應(yīng)外，還可造成DNA損傷修復(fù)基因表達(dá)異常、凋亡抑制因子表達(dá)異常、凋亡信號傳導(dǎo)異常等，限制了其應(yīng)用。本實驗擬通過AT

3、RA聯(lián)合順鉑(cisplatin，DDP)作用于人肺腺癌A549細(xì)胞株，探討其對肺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響，同時檢測不同藥物干預(yù)后A549細(xì)胞bcl-2及野生型P53基因的表達(dá)情況，以探討ATRA促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機制，同時驗證ATRA聯(lián)合順鉑是否能提高后者的化療作用，從而促進(jìn)ATRA臨床推廣應(yīng)用。
　　目的:
　　通過體外研究探討ATRA聯(lián)合DDP對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其可能機制。
　　方法:
　　1.

4、常規(guī)培養(yǎng)肺癌A549細(xì)胞，將生長狀態(tài)良好的對數(shù)期肺癌細(xì)胞分為ATRA組、DDP組、ATRA+DDP組及對照組四組，采用四甲基偶氮唑法(Mosmann Tetrozolium Test，MTT)法分別檢測作用于細(xì)胞24h、48h、72h后的吸光度值，計算在各時間段各實驗組藥物對細(xì)胞的生長抑制率。
　　2.利用流式細(xì)胞儀檢測不同藥物干預(yù)后A549細(xì)胞的凋亡比率。
　　3.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測ATRA組、DDP組、ATRA+D

5、DP組及對照組bcl-2及野生型P53基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.通過MTT實驗可觀察到，藥物干預(yù)細(xì)胞生長24h、48h、72h時，與對照組比較，ATRA組、順鉑組及兩藥聯(lián)合組的吸光度值均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);在ATRA組及聯(lián)合組，細(xì)胞生長24h、48h、72h不同時間點生長抑制率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而在DDP組，細(xì)胞生長不同時間點抑制率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。<

6、br>　　2.AnnexinV/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，分別作用24小時、48小時及72小時，ATRA、DDP、ATRA+DDP組細(xì)胞的凋亡率明顯高于對照組，ATRA組細(xì)胞的凋亡率高于DDP組;隨著作用時間的延長，除對照組外，各組細(xì)胞的凋亡率均增加。
　　3.免疫組化檢測Bcl-2及P53基因表達(dá)情況，與對照組相比，ATRA組、DDP組及聯(lián)合組bcl-2表達(dá)降低，密度及深度均減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與對照組及

7、DDP組比較，ATRA、ATRA聯(lián)合DDP作用于肺癌A549細(xì)胞后，P53表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與ATRA組相比，聯(lián)合組P53表達(dá)進(jìn)一步增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。把bcl-2與P53基因表達(dá)結(jié)果進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，繪制兩者含量的散點圖，結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)r=-0.438，P＜0.05。提示兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.ATRA對肺癌A549的增殖具有抑制作用，ATRA能促進(jìn)