全反式維甲酸對人肺腺癌細胞株A549增殖的影響及其機制研究.pdf

1、目的：通過體外研究維甲類化合物的衍生物全反式維甲酸（all—trans retinoic acid，ATRA）對人肺腺癌A549細胞株的作用，探討ATRA對A549人肺腺癌細胞株增殖的影響及其可能的機制。 方法：（1）培養(yǎng)肺腺癌A549細胞：將肺腺癌A549細胞株接種在25ml培養(yǎng)瓶內，以含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在5%CO2、37℃孵箱進行培養(yǎng)。（2）取對數(shù)生長期的常規(guī)培養(yǎng)的肺腺癌A549細胞用于實驗，實驗按A

2、TRA作用細胞的時間分為作用細胞24小時，48小時和72小時三個時間段，每個時間段再按藥物濃度分為1×10—7mol/L（第2組），1×10—6mol/L（第3組），1×10—5mol/L（第4組），1×10．4mol/L（第5組）四組藥物濃度組和不加藥的對照組（第1組）共5組，每組10個實驗孔。待各實驗濃度的藥物作用細胞于各實驗時間段后，用四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）進行測定，分別檢測各實驗組和對照組細胞的吸光度值，計算在各時間段各實

3、驗濃度藥物對細胞的生長抑制率。（3）選擇適宜的作用時間和藥物濃度用免疫細胞化學S—P（streptavidin—peroxidase）法測定血管內皮生長因子（VEGF）和基質金屬蛋白酶—2（MMP—2）的表達，培養(yǎng)同樣時間不加藥的細胞作對照組，比較實驗組與對照組細胞漿內VEGF和MMP—2的表達是否有差異。 結果：（1）當不同實驗濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞24小時后：10—7mol/L濃度組，106mol/L濃度組分

4、別與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0．05），表明此兩組濃度組作用細胞24小時后對細胞無明顯的抑制作用；10—5mol/L濃度組，10—4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05），表明對細胞有明顯的抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0．05）；綜上，用不同濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞24小時后，當達到一定的藥物濃度時對細胞有抑制作用。（2）當不同實驗濃度組的ATRA作用肺腺癌A

5、549細胞48小時后：10—7mol/L濃度組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0．05），表明此組濃度組作用細胞48小時后對細胞無明顯的抑制作用；10—6mol/L濃度組，10—5mol/L濃度組和10—4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05），表明對細胞有明顯的抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；綜上，用不同濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞48小時后，當達到一定的藥物

6、濃度時對細胞有抑制作用，且隨著濃度越大抑制越明顯。（3）當不同實驗濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后：10—7mol/L濃度組，10—6mol/L濃度組，10—5mol/L濃度組，和10—4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05），表明各濃度組對細胞均有抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；綜上，用不同實驗濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，隨著實驗組濃度

7、的升高，抑制作用愈加明顯。（4）選擇10—4mol/L濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，可見VEGF在細胞漿里的表達下降，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0．01），表明VEGF可能參與了ATRA對細胞抑制的過程。（5）選擇10—4mol/L濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，可見MMP—2在細胞漿里的表達下降，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0．01），表明MMP—2可能參與了ATRA對細胞抑制的過程