維甲酸聯(lián)合低濃度化療藥物對肺腺癌A549細胞的作用及機制的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察全反式維甲酸和不同劑量的化療藥物吉西他濱、順鉑聯(lián)合處理A549人肺腺癌細胞株,以了解不同藥物、不同劑量及不同作用時間對A549細胞增殖影響及其可能機制。
　　 方法：
　　 用MTT法測定:全反式維甲酸作用于A549細胞最適宜濃度;全反式維甲酸和化療藥物最適宜的聯(lián)合用藥時序關(guān)系;全反式維甲酸單藥組、化療藥物單藥組以及維甲酸和化療藥物聯(lián)合用藥組分別作用于A549細胞相對于對照組細胞增殖抑制率的變化

2、。運用westernblot方法檢測維甲酸單藥組、化療藥物單藥組以及維甲酸和化療藥物聯(lián)合用藥組p-ERK,RRM1,P-糖蛋白的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 MTT結(jié)果顯示,以不同濃度ATRA作用于A549細胞,隨著ATRA濃度的上升,在ATRA濃度小于20μmol/L時對于A549細胞的抑制作用也有一個明顯的提升(P＜0.01),但當ATRA濃度大于20pmol/L以后各組抑制率差別不大(P＞1)。而ATRA和順鉑以

3、不同的先后順序處理A549細胞顯示了不同的抑制效果,當順鉑作用后4h和順鉑作用后12h再加入ATRA聯(lián)合作用后A549細胞的抑制率和其他時間點比較有顯著差異(P＜0.01),但兩組之間差異并不明顯(P＞1)?？梢哉J定該兩組化療藥物作用后4h和化療無作用后12h再加入ATRA聯(lián)合作用A549細胞均可達到最佳的抑制效果。各實驗組藥物處理A549細胞24h后MTT結(jié)果顯示,吉西他濱濃度在2.0mg/L、4.1mg/L時維甲酸的增效作用并不明顯

4、,進一步加大濃度可見抑制率上升明顯。在同等吉西他濱藥物濃度情況下,聯(lián)合全反式維甲酸可見A549細胞增殖抑制率明顯上升。而維甲酸聯(lián)合每一個順鉑濃度組在抑制率的比較上都有一定程度的提升。同樣,在同等順鉑藥物濃度情況下,聯(lián)合全反式維甲酸可見A549細胞細胞增殖抑制率明顯上升。Westernblot結(jié)果顯示各個藥物處理組處理A549細胞24h后,除RRM1蛋白表達均較低外各表達條帶均可見明顯差別,p-ERK的表達在維甲酸單藥組、化療單藥組和對照

5、組差別不明顯,但聯(lián)合用藥組可明顯見到條帶減弱,P-糖蛋白雖然各組表達都較弱,但仍可以看出在化療單藥組和對照組中差別不明顯,而加入ATRA的處理組P-糖蛋白表達減進一步減弱。
　　 結(jié)論：
　　 全反式維甲酸和各濃度的順鉑、吉西他濱聯(lián)合用藥可以在達到同等抑制效果的情況下減少順鉑及吉西他濱所需要的濃度。全反式維甲酸可通過抑制ERK-MAPK通路,間接或直接抑制RRM1和P-糖蛋白的表達,從而在增加化療敏感性的同時降低化療耐藥