PTEN基因抑制肺腺癌A549細(xì)胞增殖機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:研究PTEN基因?qū)Ψ蜗侔〢549細(xì)胞增殖的抑制作用以及這種抑制肺腺癌A549細(xì)胞增殖的作用與hTERT基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要實(shí)驗(yàn)分為7組:對(duì)照組,空載體組,野生型PTEN基因組,突變型PTEN基因組,PI3K/AKT途徑阻滯劑LY294002處理組,siRNA PTEN組,siRNA PTEN轉(zhuǎn)染聯(lián)合LY294002處理組。應(yīng)用MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)分析各組細(xì)胞凋亡率變化。應(yīng)用RT-P

2、CR技術(shù)檢測(cè)各組PTEN mRNA,hTERT mRNA表達(dá)高低,應(yīng)用western-blotting方法檢測(cè)PTEN,p-AKT,hTERT蛋白表達(dá)水平。以此探討PTEN基因抑制肺腺癌A549細(xì)胞增殖與hTERT基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果:(1)、野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞增殖受抑制,凋亡率增加(P＜0.05),而空載體和突變型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖與凋亡率未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05)；(

3、2)、野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)的p-AKT表達(dá)降低(P＜0.05),而空載體和突變型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞的p-AKT表達(dá)未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05)；(3)、siRNA PTEN轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖明顯增強(qiáng),凋亡明顯降低,細(xì)胞的p-AKT表達(dá)增加；應(yīng)用PI3K/AKT阻滯劑LY294002處理A549細(xì)胞后,細(xì)胞的p-AKT表達(dá)降低,細(xì)胞的增殖受抑制,凋亡增加(P＜0.05)；(4)、野生型

4、PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞的hTERT mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(P＜0.05),而空載體和突變型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,細(xì)胞的hTERT mRNA和蛋白表達(dá)水平未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05),siRNA PTEN轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,hTERT mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增加(P＜0.05)；應(yīng)用PI3K/AKT阻滯劑LY294002處理后A549細(xì)胞后,細(xì)胞的hTERT mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(P＜0.05)。<