褪黑素對肺腺癌A549細胞的增殖和遷移抑制作用及其機制的初步探討.pdf

1、目的：研究褪黑素對肺腺癌細胞系 A549的增殖、遷移能力的影響,并初步探討其可能的作用機制。
　　方法：以人肺腺癌細胞株A549為研究對象,分別用不同濃度(0.1、0.5、0.75、1.0、2.5、5.0 mmol/L)的Mel處理A549細胞,在不同的時間(1、3、7 d)后,用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測Mel對A549細胞增殖的影響;倒置顯微鏡下觀察A549細胞形態(tài)學(xué)變化。劃痕實驗檢測該藥對A549細胞遷移能力的影響。用免

2、疫熒光方法分析Mel處理對A549細胞中緊密連接相關(guān)蛋白Occludin細胞分布的影響。Western blot分析A549細胞經(jīng)Mel處理后MAPK信號通路相關(guān)蛋白及OPN,Occludin表達的變化。
　　結(jié)果：Mel對A549細胞有明顯的增殖抑制作用,并呈濃度依賴性和時間依賴性,Mel對A549細胞抑制半數(shù)抑制濃度IC50為1.864 mmol/l;(2.0 mmol/L)Mel處理組A549細胞數(shù)量減少,形態(tài)由梭形變成不規(guī)

3、則形,細胞間間隙明顯增大,成單層生長。Mel可以明顯抑制細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力,隨著Mel濃度的增加和時間延長,其抑制細胞遷移作用增強,(5.0mmol/L) Mel處理A549細胞24 h,其遷移率僅為20％。免疫熒光分析表明,Mel能夠促進A549細胞中緊密連接相關(guān)蛋白Occludin細胞膜的分布,從而促進緊密連接的形成。Western blot檢測顯示2.0 mmol/L濃度的Mel能顯著抑制JNK、p38的磷酸化,而使ERK磷酸化水平